[发明专利]中国鲎素组成型酵母表达载体及其制备方法有效
申请号: | 201210051429.4 | 申请日: | 2012-03-01 |
公开(公告)号: | CN103233035A | 公开(公告)日: | 2013-08-07 |
发明(设计)人: | 韩文瑜;冯新;雷连成;宋战昀;刁昱文;赵红蕾;高宇 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12N15/81 | 分类号: | C12N15/81;C12N15/66 |
代理公司: | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人: | 白冬冬 |
地址: | 130062 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 中国 组成 酵母 表达 载体 及其 制备 方法 | ||
1.一种中国鲎素组成型酵母表达载体的制备方法,其特征在于:根据tachyplesins基因的测序结果设计引物TP I-NNX1和TP I-NNX2,含如下酶切位点:
上游引物TP I-NNX1:5’-CCGC|TCGAGAAAAGAAAATGGTGCTTCCGTGTTTG-3’
Xho I
下游引物TP I-NCX2:5’-GCT|CTAGATTAACGGCAACGACGGTAGCAG-3’
Xba I
根据pGAPZα使用手册合成通用引物:
上游引物5’ pGAP:5’-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3’
下游引物3’AOX1:5’-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3’
对TP I基因的克隆质粒pMD-18T-TP I和酵母表达载体pGAPZα A进行双酶切,回收酶切目的片段,用T4 DNA连接酶连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性转化子,提取质粒,进行PCR和双酶切鉴定,并进行测序。
2. 由权利要求1的方法获得的中国鲎素组成型酵母表达载体pGAPZα A-TPI。
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