[发明专利]氯霉素抗性温控裂解质粒及其构建与在菌蜕制备中的应用无效
| 申请号： | 201210053572.7 | 申请日： | 2012-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN102586307A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 祝文兴;安利国;杨桂文;袁金铎 | 申请（专利权）人： | 山东师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12N1/20 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 杨琪 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氯霉素 抗性 温控 裂解 质粒 及其 构建 制备 中的 应用 | ||
1.一种氯霉素抗性温控裂解质粒pBV-geneE-cat，其特征在于：由噬菌体PhiX174裂解基因E、氯霉素乙酰转移酶基因和原核温控表达载体pBV220组成。
2.权利要求1所述的氯霉素抗性温控裂解质粒pBV-geneE-cat的构建方法，其特征在于：以噬菌体PhiX174RFI DNA为模板、SEQ No.1和SEQ No.2所示DNA为引物进行PCR扩增，获得噬菌体PhiX174裂解基因E，然后将其与经EcoR I和Pst I双酶切的pBV220载体连接，获得温控裂解质粒pBV-geneE；将质粒pLysS经Acc II酶切，获得1787bp的包含侧翼调控序列的cat基因，然后用T4DNA ligase将cat基因与经Sca I单酶切的pBV-geneE进行连接，获得氯霉素抗性温控裂解质粒pBV-geneE-cat。
3.权利要求1所述的氯霉素抗性温控裂解质粒pBV-geneE-cat在制备菌蜕中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：制备菌蜕的方法如下：将氯霉素抗性温控裂解质粒pBV-geneE-cat电击转化到大肠杆菌感受态细胞中；电转化后涂布含氯霉素的LB琼脂平板，培养，通过菌落PCR鉴定转化子；然后，将转化成功的含pBV-geneE-cat的大肠杆菌单克隆接种于含氯霉素的LB液体培养基，振荡培养，然后再转接于含氯霉素的LB液体培养基中，振荡培养至OD600nm达0.4-0.6，将培养物迅速调至42℃培养以诱导E基因的表达，继续培养，即得大肠杆菌菌蜕。
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