[发明专利]摩加夫芽孢菌和抗真菌脂肽类化合物及其制备和应用

权利要求书

1.一种抗真菌脂肽类化合物，其特征在于：该化合物命名为anteiso-C15 mojavensin A，该化合物的化学结构为：

2.一种摩加夫芽孢菌，其特征在于：所述菌株为摩加夫芽孢菌B0621A，Bacillus mojavensis B0621A，已经于2012年02月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，简称：CCTCC，地址：中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC No.M 2012023；于2012年02月17日检测存活。

3.一种权利要求1所述化合物anteiso-C15 mojavensin A的获取方法，其特征在于：用于产生该脂肽的摩加夫芽孢菌B0621A，分离自中国南海涠洲岛珍珠贝的外状膜中；

将摩加夫芽孢菌B0621A发酵培养，发酵液经过酸沉淀获得粗脂肽，将粗脂肽上硅胶色谱柱进行洗脱分离，洗脱组份经过高效液相色谱方法分离得到anteiso-C15 mojavensin A单体化合物。

4.按照权利要求3所述的获取方法，其特征在于：

摩加夫芽孢菌B0621A发酵培养基的重量组成如下：蔗糖(1～5)％，KH₂PO₄(0.1～1.0)％，Na₂HPO₄(0.1～3)％，NH₄NO₃(0.1～1.0)％，MgSO₄·7H₂O(0.01～0.05)％，酵母粉(0.01～0.05)％，CaCl₂(0.1～1.0)μg/100mL，MnSO₄·H₂O(0.1～2.0)μg/100mL，pH(5.0～9.0)，余量为水；

发酵结束后，用质量浓度2％的NaOH溶液调发酵液的pH至8.0，然后在常温下于4000rpm离心30min，除去菌体及其它固形物；所得到的发酵上清液用6mol/L盐酸调pH至2.0，于4℃冰箱内放置过夜，次日于4000rpm离心30min，收集沉淀，并用pH 2.0的稀盐酸反复洗涤沉淀三次，以除去表面残余上清。所得沉淀物用甲醇提取，反复提取三次后将提取液旋转蒸发除去甲醇，干燥后即得到粗脂肽15.51g。

将粗脂肽，上硅胶色谱柱(60mm×100mm)，依次以0/100，1/99，2/98，5/95，10/90，20/80，30/70，50/50，100/0的甲醇/二氯甲烷洗脱液各400ml进行减压快速洗脱。然后收集各洗脱组分，旋转蒸发干燥后称重并检测抗真菌活性(滤纸片法)，保留其中含有抗真菌脂肽、即具有抗真菌活性的的组分(以苹果干腐病菌(Valsa mali)为检测靶菌)。

经减压快速洗脱得到的活性部分流分8用流动相溶解后进行RP-HPLC分析并制备，采用YMC ODS-A半制备柱(250mm×10mm)，色谱条件为：流动相为甲醇∶0.05％(v/v)TFA水溶液＝75∶25(v/v)，流速2.5mL/min，进样量250μL，检测波长210nm。可制备得到目标化合物50mg。

5.一种权利要求1所述化合物anteiso-C15 mojavensin A的应用，其特征在于：anteiso-C15 mojavensin A对植物病原真菌、细菌或肿瘤细胞都有生物活性，可作为活性成份用于生物药物或生防制剂中。