[发明专利]摩加夫芽孢菌和抗真菌脂肽类化合物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及从海洋细菌的发酵液中提取分离具有生物活性的脂肽类化合物，具体的说是从摩加夫芽孢菌(Bacillus mojavensis)B0621A的发酵液中分离纯化一种新型脂肽anteiso-C15 mojavensin A，及该脂肽在抗真菌，抗细菌，抗肿瘤细胞方面应用的潜力。

背景技术

芽孢杆菌属能够产生抑制植物病原菌生长的杀菌物质，加之芽孢菌有着能够形成芽孢的特质，在农业病害的防治上面起了举足轻重的作用。芽胞杆菌具有着田间应用的良好前景，因此很多研究者致力于芽孢杆菌生防机制的研究。芽孢杆菌的生防机制是相对复杂的，它不是单一的因素起作用的。这或许与芽孢菌产生的次级代谢产物、芽孢菌和植物之间的相互作用、植物体对芽孢菌的应激性反应有关。

大多数芽孢杆菌能够产生脂肽类物质。通常包括iturin、fengycin、surfactin家族等类的脂肽。三大家族的脂肽具有抗植物病原真菌的能力。Maurice E.Snook等人从内生菌Bacillus mojavensis RRC 101中分离和鉴定了Leu⁷-Surfactin，对玉米和其他植物中的Fusarium verticillioides(串珠镰刀菌)有着较好的拮抗作用，并且能够减少串珠镰刀菌毒素的产量。Lili Chen等人从深海来源的Bacillus amyloliquefaciens SH-B10中分离得到了C16 fengycin A和一个新型的fengycin类型的脂肽，这两个化合物对于Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum，Fusarium graminearum，F.oxysporum f.sp.vasinfectum，F.oxysporum f.sp.cucumis melo L.和F.graminearum f.sp.zea mays L.这五种土著的植物病原菌有较好的拮抗作用。Nopporn Thasana等人从Bacillus subtilis SSE4中分离得到了新型的iturin类型的脂肽Subtulene A，对于Colletotrichum gloeosporioides有着较好的防效。

脂肽类物质有着诱导植物体产生系统抗性(ISR)的作用。Marc Ongena等人研究发现，豆类、西红柿等植物体能够感应surfactin和fengycin等化合物，并且作为信号激活了防御机制——植物体产生了诱导抗性。

目前已经发现的iturin家族的脂肽有很多种类，这些iturin家族的脂肽大都具有抗真菌的活性，mixirin还有着抗肿瘤细胞的活性。这些脂肽的结构总结如下：

发明内容

本发明目的在于阐明一种新型的抗菌脂肽类先导化合物anteiso-C15 mojavensin A的分离纯化和潜在应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种抗真菌脂肽类化合物anteiso-C15 mojavensin A，分离自中国南海涠洲岛珍珠贝的外状膜中分离得到的摩加夫芽孢菌Bacillus mojavensis B0621A的发酵液，经提取分离得到的1种新的环脂肽类化合物，采用高分辨质谱和核磁共振等光谱技术，确定了该化合物的化学结构；

摩加夫芽孢菌B0621A，Bacillus mojavensis B0621A，已经于2012年02月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，简称：CCTCC，地址：中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC No.M 2012023；于2012年02月17日检测存活。

将能够产生该脂肽的摩加夫芽孢菌B0621A在发酵培养基中培养后，通过离心、酸沉淀、甲醇提取从摩加夫芽孢菌B0621A的发酵液中制备粗脂肽，得到的粗脂肽上硅胶色谱柱，以病原真菌为检测靶菌，其中的活性部分进行RP-HPLC分析并制备，得到目标化合物。通过高分辨质谱和核磁共振等技术确定了该化合物的结构，命名为anteiso-C15 mojavensin A，该化合物的结构如下：