[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因PCR同步检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域，具体涉及一种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因PCR同步检测试剂盒。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，简称金葡菌)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到，因而食品受其污染的机会很多。食品受其污染后，不仅腐败变质，而且部分菌株产生葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxins，SEs)。肠毒素是一类结构相关，毒力相似，抗原性不同的胞外蛋白质。根据其抗原性可将其分为5个血清型：SEA、SEB、SEC、SED和SEE，这五类称为经典肠毒素(其中SEC中包括SEC1、SEC2和SEC3三种亚型)，也是全球食物中毒中最常见的血清型。各型肠毒素均可引起细菌性食物中毒，其中以A、D型引起的食物中毒最多，B型和C型次之。

金黄色葡萄球菌在pH值低于5的条件下很少产生肠毒素，当pH值高于9.8时，无论何型肠毒素都不能产生。葡萄球菌在牛奶和谷粉粥上于20～37℃下经4～8h产生毒素，在5～6℃低温下18d产生毒素或不产生毒素。在含水分、蛋白质和淀粉较多的食品中，葡萄球菌较易繁殖并产生毒素，如带菌的生肉馅，于37℃下经18～19h产生毒素，若在肉馅中加入少量馒头碎屑，在同样温度下只经过8h就能产生毒素，可见淀粉对形成毒素有促进作用。

引起金黄色葡萄球菌肠毒素中毒的食品：主要为肉、奶、鱼、蛋类及制品等动物性食品。糕、凉拌切粉、剩饭和米酒等也曾引起过中毒；熟肉类如在熟后污染了致病葡萄球菌，又在20～30℃的环境下放置较长时间，则极易引起中毒；奶和奶制品以及用奶制作的冷饮和奶油糕点常是引起中毒的食品；油煎鸡蛋、熏鱼、油浸鱼罐头等含油脂较多的食品，在污染上致病性葡萄球菌以后也能产生毒素。金黄色葡萄球菌在空气中养分低时较易产生毒素，因此带有此菌的食品，在通风不良的高温下放置，极有利此菌生长并产生毒素。当食品污染了葡萄球菌并同时污染了其它微生物时，葡萄球菌的繁殖则受到抑制。如食品经加热，原有的各种微生物已被杀死，拮抗微生物也不复存在，熟后再一次被葡萄球菌污染，则将会促进葡萄球菌的生长并形成毒素。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在世界各地均有发现。常发生于夏秋季节，这是因为气温较高，有利于细菌繁殖。但在冬季，如受到污染的食品在温度较高的室内保存，葡萄球菌也可繁殖并产生毒素。当此细菌数＞10⁶个/克时，产生的肠毒素可引起食物中毒等病症。

目前，检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法有酶联免疫双抗法，双向琼脂扩散法。酶联免疫双抗法的缺点是易受食物成分及葡萄球菌蛋白A的影响，检测时间长，费用较高，不利于在基层单位推广使用。双向琼脂扩散法检测时间长，灵敏度低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因PCR同步检测引物、其检测试剂盒和检测方法。

本发明提供一种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因PCR同步检测引物，其为：

SEAB-F：5’-TGATAAATAYAAAGRKAAAWAMGTAG-3’(SEQ ID No.1)

SEAB-R：5’-GTTACACCACCATACATRCAAG-3’(SEQ ID No.2)。

其中，Y为C或T，R为A或G，K为G或T，W为A或T，M为A或C。

其中所述的引物扩增片段为SEA的566-670bp的片段和SEB的338-472bp的片段，PCR扩增产物长度分别为105bp和135bp。根据电泳结果，即可判断为何种肠毒素基因。

本发明还提供含有上述引物的金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因PCR同步检测试剂盒，所述试剂盒还可包括PCR缓冲液、dNTPs、无菌超纯水和Taq DNA聚合酶等。

本发明还提供应用上述的试剂盒在食品中食品中检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的方法，其包括：

1)提取食品中的DNA；

2)以步骤1)提取的DNA为模板进行PCR反应；

3)对PCR产物进行电泳检测。

其中，所述的PCR反应体系为：每20μl的反应液中，含有10-50ng的模板、20-30pM各上下游引物、10×PCR缓冲液2μl、0.15-0.25mM的dNTPs，1-1.5U的Taq DNA聚合酶，无菌超纯水补足体积。