[发明专利]一种孔雀石绿半抗原制备方法及其应用

权利要求书

1.式(1)所示化合物：

式1。

2.式(1)所示化合物的制备方法，按照式(2)进行，包括如下步骤：

(1)于25mL三角瓶中加入1g对羟基苯甲醛，2g氯化锌，溶于20mL无水乙醇中；

(2)加入3mLN，N-甲基苯胺，90℃回流24h，反应完毕，减压去溶剂，柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚，1/2，v/v)；

(3)将其溶于20mL吡啶中，加入琥珀酸酐0.74g(与底物摩尔比为1∶1.2)。在80℃下反应20h，反应完毕，减压去溶剂。加入稀盐酸调pH值至5左右，加入乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，无水硫酸镁干燥，减压去溶剂，柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚，2/1，v/v)。

式2。

3.一种孔雀石绿抗原，是将式(1)所示化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物。

4.权利要求3所述孔雀石绿抗原的制备方法，包括如下步骤：

(1)取10mg半抗原，溶解于1mL二甲基甲酰胺(DMF)中； 

(2)取15mg二氯乙烷(EDC)用0.2mL水充分溶解后于加入半抗原溶解液中，室温下搅拌24h，即可得到反应液A；

(3)称取载体蛋白40mg，使之充分溶解在2.8mL PBS(PH 7.2)中，将反应液A逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌24h；

(4)用0.01mol/L PBS 4℃透析3d每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；

(5)分装，于-20℃保存备用。

5.权利要求3所述孔雀石绿抗原在制备孔雀石绿特异性单克隆抗体中的应用。

6.应用权利要求3所述孔雀石绿抗原制备得到的特异性多克隆抗体或单克隆抗体。

7.权利要求1所述化合物、权利要求3所述孔雀石绿抗原、权利要求6所述抗体在检测孔雀石绿中的应用。

8.应用权利要求1所述化合物、权利要求3所述孔雀石绿抗原、权利要求6所述特异性单克隆抗体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。

9.权利要求8所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于它含有：包被有包被原的酶标板；酶标二抗；孔雀石绿特异性抗体、孔雀石绿系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涤液、氧化剂浓缩液、孔雀石绿提取剂、样品净化剂。