[发明专利]甲基对硫磷半抗原及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种甲基对硫磷半抗原，其特征在于分子结构式为：

。

2.一种制备权利要求1所述甲基对硫磷半抗原的方法，其特征在于包括如下步骤：

a)把三氯硫磷放入单口瓶中搅拌，缓慢滴加无水甲醇，保持温度10℃，滴毕继续反应，用大量冷水洗涤，静止分层，下层为目标物，无水硫酸镁干燥；

b)将对硝基苯酚与氢氧化钠溶于(水/二氯甲烷，1/3，v/v)中，加入苯硫脲(PTC)，搅拌，将其缓慢滴入含有O-甲基硫代磷酰二氯(与对硝基苯酚摩尔比1/2)的单口瓶中，保持温度10℃，反应，将反应液蒸干，柱层析纯化，得无色液体；

c)将3-巯基丙酸与氢氧化钠溶于无水甲醇中，搅拌，将其滴入含有一氯(与巯基丙酸摩尔比1/1)的单口瓶中，保持10℃，滴毕继续反应，加入冷水，石油醚萃取出极性小杂质，将水相调pH至5左右，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化，得白色固体，即为甲基对硫磷半抗原。

3.一种甲基对硫磷抗原，其是由权利要求1所述的甲基对硫磷半抗原与载体蛋白偶联得到，其特征在于分子结构式为：

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4.如权利要求3所述的甲基对硫磷抗原，其制备方法包括如下步骤：

取甲基对硫磷半抗原充分溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，得到溶液I；称取载体蛋白，使之充分溶解在磷酸盐缓冲液(pH 7.2)中，将溶液I逐滴缓慢滴加到该载体蛋白溶液中，得到溶液II；称取碳化二亚胺(EDC)用水溶解后缓慢于室温下加入溶液II中，搅拌；用0.01mol/L PBS透析3d，每天换2次透析液，以除去未反应的小分子物质；以12000r/min离心30min，收集上清，即得甲基对硫磷免疫原，分装，于-20℃保存备用。

取甲基对硫磷半抗原用DMF溶解，冷却至10℃，加入氯甲酸异丁酯，10℃搅拌反应，得到反应液A；称取载体蛋白，使之充分溶解在50mmol/L碳酸钠溶液中，将反应液A逐滴 缓慢滴加到该溶液中，10℃反应，然后4℃过夜；用0.01mol/L PBS透析3d，每天换2次透析液，以除去未反应的小分子物质；以12000r/min离心30min，收集上清，即得甲基对硫磷包被原，分装，于-20℃保存备用。

5.一种甲基对硫磷抗体，其是由甲基对硫磷免疫原免疫动物制备得到。

6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于所述抗体为甲基对硫磷单克隆抗体。

7.一种由权利要求5-6任一项所述的抗体制备的甲基对硫磷酶联免疫试剂盒。

8.一种甲基对硫磷酶联免疫试剂盒检测玉米、苹果样本中甲基对硫磷残留的应用。