[发明专利]甲基对硫磷半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及甲基对硫磷半抗原及其制备方法和应用。

技术背景

甲基对硫磷(Parathion methyl，O，O-二甲基-O-对硝基苯基硫代磷酸酯)，是一种广谱有机磷杀虫剂、杀螨剂，在世界范围内广泛应用于水稻、棉花、果树、茶叶、蔬菜等经济作物的害虫防治。其作用机制及杀虫谱与对硫磷相似，但该药的药效比对硫磷低，且残效短，对人、畜的毒性也较低，但它仍属高毒农药，且有内吸性，因而限制了它的使用。尽管如此，近年来，因甲基对硫磷中毒的报道仍然屡见不鲜，尤其是在作物和蔬菜上的大量使用，对人体健康造成极大的危害。因此，开发一种简单快速、适用于农药残留现场监控的分析方法具有重要的现实意义。

目前，甲基对硫磷残留的检测方法主要为仪器法，如气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)等，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国经济作物种植户、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲基对硫磷半抗原及其制备方法。

本发明提供的甲基对硫磷半抗原，分子结构式为：

本发明提供的甲基对硫磷半抗原的制备方法，包括如下步骤：

a)把三氯硫磷放入单口瓶中搅拌，缓慢滴加无水甲醇，保持温度10℃，滴毕继续反应，用大量冷水洗涤，静止分层，下层为目标物，无水硫酸镁干燥；

b)将对硝基苯酚与氢氧化钠溶于(水/二氯甲烷，1/3，v/v)中，加入苯硫脲(PTC)，搅拌，将其缓慢滴入含有O-甲基硫代磷酰二氯(与对硝基苯酚摩尔比1/2)的单口瓶中，保持温度10℃，反应，将反应液蒸干，柱层析纯化，得无色液体；

c)将3-巯基丙酸与氢氧化钠溶于无水甲醇中，搅拌，将其滴入含有一氯(与巯基丙酸摩尔比1/1)的单口瓶中，保持10℃，滴毕继续反应，加入冷水，石油醚萃取出极性小杂质，将水相调pH至5左右，二氯甲烷萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化，得白色固体，即为甲基对硫磷半抗原。

本发明的另一个目的是上述甲基对硫磷半抗原在免疫检测中的应用，具体包括由所述甲基对硫磷半抗原与载体蛋白偶联得到的甲基对硫磷抗原，及由所得甲基对硫磷抗原免疫动物制备得到的甲基对硫磷抗体。

其中所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原，

所述抗体为甲基对硫磷单克隆抗体。

本发明还提供由上述甲基对硫磷抗体制备的酶联免疫试剂盒，及其在检测玉米、苹果样本中甲基对硫磷残留的应用。

本发明提供的甲基对硫磷半抗原既最大程度地保留了甲基对硫磷的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的-COOH，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体用于酶联免疫试剂盒，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于玉米、苹果样本中甲基对硫磷残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的甲基对硫磷半抗原在甲基对硫磷的检测中发挥重要作用。

附图说明

图1：甲基对硫磷半抗原合成路线图

图2：甲基对硫磷半抗原核磁共振氢谱图

图3：甲基对硫磷物酶联免疫试剂盒标准曲线

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1甲基对硫磷半抗原的合成和鉴定

一、甲基对硫磷半抗原的合成(合成路线如图1)

a)把三氯硫磷放入单口瓶中搅拌，缓慢滴加无水甲醇(与三氯硫磷摩尔比为1∶4)，保持温度10℃，滴毕继续反应1h，用大量冷水洗涤，静止分层，下层为目标物，无水硫酸镁干燥；