[发明专利]一种同时检测鸡蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种同时检测鸡蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法。

背景技术

目前国内外报道关于动物源性食品中氯霉素类药物的检测方法，主要有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用法、液质联用法等，但到目前为止，同时检测鸡蛋中氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)、氟苯尼考(FF)和代谢物氟苯尼考胺(FFA)残留的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)的研究国内外尚未见报道。根据欧盟委员会2002/657/EC决议的规定，禁用兽药的确证检测方法必须能提供结构方面的信息，且要达到法规规定的4个确证分。氯霉素作为禁用兽药，其阳性结果必须经过质谱确证。

发明内容

为了能同时检测并确证氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代谢物氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留，满足欧盟标准，本发明提供了一种高效液相色谱-串联质谱法，能同时检测鸡蛋中多种氯霉素类药物的残留。

本发明所采用的技术方案是：一种同时检测鸡蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代谢物氟苯尼考胺残留的方法，是将鸡蛋样品经过提取、净化后，以乙腈-水为流动相，采用高效液相色谱-串联质谱法检测。

液相色谱条件为：色谱柱，Eclipse Plus C₁₈，5μm，50mm×4.6mm i.d.；保护柱，C₁₈柱，5μm；流动相，乙腈-水；流速：0.8mL·min^-1；柱温：25℃；进样体积：20μL。分离CAP、TAP、FF和FFA的梯度洗脱程序见表1。

表1 分离CAP、TAP、FF和FFA的梯度洗脱程序

质谱条件为：离子源，电喷雾离子源(ESI)；扫描方式，正离子扫描(FFA)和负离子扫描(CAP、TAP、FF和d₅-CAP)；检测方式，多反应监测(MRM)；电喷雾毛细管电压，4000V(正离子扫描)、3500V(负离子扫描)；干燥气温度：300℃；干燥气流速，10L·min^-1；雾化器气体压力，15psi；鞘气温度，250℃；鞘气流速，7L·min^-1；二级碰撞气；氮气。CAP、TAP、FF和FFA的保留时间和优化质谱条件见表2。

表2 CAP、TAP、FF和FFA的保留时间和优化质谱条件

注：*定量离子

本发明中鸡蛋样品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和代谢物氟苯尼考胺的提取和净化推荐使用碱性乙酸乙酯提取，用正己烷净化。具体操作是：将鸡蛋制成匀浆后，加入氘代氯霉素d₅-CAP内标溶液，然后加入30％乙腈溶液混匀，再用体积比49∶49∶2的乙酸乙酯∶乙腈∶氨水提取，提取液再经饱和正己烷脱脂，提取液重复去脂一次，最后用氮吹仪吹干。上机前残渣用1.0mL 10％乙腈分两次漩涡振荡溶解，转移至1.5mL离心管中；12100×g离心15分钟，上清液经0.22μm滤膜过滤，滤液供HPLC-MS/MS测定。

附图说明

图1是鸡蛋中CAP的基质添加标准曲线。

图2是鸡蛋中TAP的基质添加标准曲线。

图3是鸡蛋中FF的基质添加标准曲线。

图4是鸡蛋中FFA的基质添加标准曲线。

图5是空白鸡蛋样品离子色谱图。

图6是基质添加标准品离子色谱图。

图7是添加鸡蛋样品离子色谱图。

图8CAP的子离子扫描图。

图9TAP的子离子扫描图。

图10FF的子离子扫描图。

图11FFA的子离子扫描图。

图12d₅-CAP的子离子扫描图。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

本发明中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为质量百分浓度。

1、实验鸡的饲养、给药和样品采集