[发明专利]金线莲醣苷的定量分析方法及分离方法

说明书

技术领域

本发明是有关一种定量分析金线莲植物或金线莲植物干燥产品中的金线莲醣苷类化合物(kinsenosides)的含量的方法。本发明也提供一种从金线莲植物或金线莲植物干燥产品中分离金线莲醣苷类化合物(kinsenosides)的方法。 

背景技术

金线莲植物(Anoectohilus formosanus)可发现于台湾及琉球。金线莲醣苷已被证实具有保肝、抗脂质过多、抗发炎等能力，是金线莲植物及其衍生保健产品中重要的活性成分。 

金线莲醣苷(kinsenoside)本身缺乏发色基团，因此UV检测器对此化合物的检测灵敏度很差。过去文献报导使用HPLC-RI作为定量分析方法，但RI检测器本身即存在对温度敏感、基线不稳定、灵敏度不佳等问题。 

因此极需一种快速分离及定量分析金线莲植物及其衍生保健产品中的金线莲醣苷成分的方法。 

发明内容

本发明的目的是提供一种方便、安全、不破坏样品且不需衍生化、不添加化学位移试剂的快速分离及定量分析金线莲植物活性成分金线莲醣苷(kinsenoside)及金线莲植物中其它四个主要化合物的方法。 

依本发明所完成的一种定量分析金线莲醣苷的方法包含下列步骤： 

a)提供金线莲醣苷的粗萃取物； 

b)层析分离该粗萃取物以得到含有下列式1的金线莲醣苷及不含对以下步骤c)的金线莲醣苷1的质子核磁共振分析产生干扰的干扰物的样品； 

c)对该样品进行质子核磁共振分析(¹H NMR)，其中反丁烯二酸被使用作为内标准品；及 

d)对所得到的¹H NMR图谱中在δ2.88化学位移处的讯号峰的进行积分，得到代表金线莲醣苷1的面积，及对δ6.50化学位移处的讯号峰的进行积分，得到代表反丁烯二酸的面积，及利用该金线莲醣苷1的面积对该反丁烯二酸的面积的比值计算出该样品中的金线莲醣苷1的含量。 

较佳的，该样品除了含有该金线莲醣苷1外，进一步含有具有下列结构的化合物2、化合物3、化合物4及化合物5中的至少一种； 

及利用该¹H NMR图谱中在化学位移处δ2.47、δ1.12、δ7.05及δ7.84的讯号峰的积分面积对反丁烯二酸的该积分面积的比值计算出该样品中的化合物 

2、化合物3、化合物4及化合物5的含量。 

较佳的，该¹H NMR分析使用含有氘的极性溶剂。 

较佳的，该¹H NMR分析使用重水(D₂O)作为溶剂。 

较佳的，该步骤b)的层析包含使用一逆相层析管柱进行该层析分离，及依序以第一冲提液及第二冲提液冲提该逆相层析管柱，及收集第二冲提液所 产生的溶离液(eluate)作为该样品的来源，其中该第一冲提液为水，及该第二冲提液为水与甲醇或乙醇的混合液。更佳的，该逆相层析管柱为大孔树脂或葡聚糖(dextran)凝胶管柱，及该第二冲提液为水与甲醇的混合液，其中水与甲醇的体积比为9∶1至6∶4。最佳的，该第二冲提液为水与甲醇的混合液，其中水与甲醇的体积比约为7∶3。 

较佳的，该步骤a)的粗萃取物的提供包含以水、有机溶剂或它们的混合物萃取新鲜金线莲植物或干燥的金线莲植物产品，及浓缩萃取液得到该粗萃取物。 

较佳的，步骤a)的粗萃取物的提供包含以甲醇萃取新鲜金线莲植物或干燥的金线莲植物产品。 

本发明也提供一种从金线莲植物分离出金线莲醣苷(kinsenoside)的方法，包含下列步骤： 

a)提供含有金线莲醣苷的粗萃取物；及 

b)层析分离该粗萃取物以得到含有下列式1的金线莲醣苷 

其中步骤b)的层析包含使用一逆相层析管柱进行该层析分离，及依序以第一冲提液及第二冲提液冲提该逆相层析管柱，及收集第二冲提液所产生的中段溶离液(eluate)，挥发移除该溶离液中的溶剂而获得金线莲醣苷，其中该第一冲提液为水，及该第二冲提液为水与甲醇或乙醇的混合液。 

较佳的，本发明分离方法中的逆相层析管柱为硅胶管柱，及该第二冲提液为水与甲醇的混合液，其中水与甲醇的体积比为9∶1至6∶4。更佳的，第二冲提液为水与甲醇的体积比约为8∶2。