[发明专利]一种农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法，其特征在于包含外植体的获得，遗传转化及共培养，芽伸长和筛选培养，生根培养；其特征在于：以整体子叶节作为外植体，用无菌棉球蘸取携带目标基因的农杆菌工程菌液侵染整体子叶节进行遗传转化。

2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法，其特征在于所述的整体子叶节外植体通过如下方法获得：取饱满、无病虫害的大豆种子，消毒后将种子在无菌水中浸泡12小时后接种于MSB培养基，培养6-7天当无菌苗的两子叶刚展开，去掉初生叶、上胚轴、根，留取约3-3.5cm的完整的子叶下轴和两个子叶，在两子叶之间的腑芽和顶端分生组织表面用无菌刀片轻轻的划5-6下，就得到用于转化的整体子叶节外植体。

3.根据权利要求2所述的农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法，其特征在于所述的遗传转化及共培养是用无菌棉球蘸取携带目标基因的农杆菌工程菌液放于两子叶间的划伤组织上，接种于附加3.5mg/L BAP、0.2mg/LIBA、0.2mg/LKT，pH5.8的MSB培养基中，于26℃、黑暗条件下与携带目标基因的农杆菌菌液棉球共培养3天。

4.根据权利要求3所述的农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法，其特征在于所述的共培养的第二天用移液枪吸取携带目标基因的农杆菌工程菌液滴到所述的无菌棉球上，所用菌液中附加500mg/L的L-半胱氨酸。

5.根据权利要求3所述的农杆菌介导的大豆快速遗传转化方法，其特征在于所述的共培养结束后，去掉棉球，不转换培养基，直接将外植体转入光下，于26℃培养，7天后，外植体转入附加500mg/L头孢噻肟和150mg/L卡那霉素，pH5.8的MSB进行为期12天的芽的伸长及筛选培养，当抗性分化芽长至3-4cm时，切下，转入生根培养基附加1.0mg/LNAA、500mg/L头孢噻肟，pH5.8的MSB中进行生根10-15天，10-15天后，生根的转基因植株可移栽入土中。