[发明专利]海洋生物胶原多肽

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种提高人体机体免疫力、抗氧化、抗衰老、抗溃疡、降血压、预防骨质疏松、促进上皮组织细胞修复与生长等具备多种优异抗氧化生理活性的胶原肽制品、特别是涉及一种以海洋生物为基础材料提取胶原多肽及其制造方法。

二、背景技术

多棘海盘车是一种常见的海洋无脊椎生物，棘皮动物门海星纲，少数沿海地区将其作为休闲食品，但绝大多数是被废弃。近年来其药用价值已逐渐受到医学界关注，多棘海盘车体内富含多种具有良好生物活性的有机物成分包括皂苷、甾醇、生物碱、多糖等，此外其体壁中还含有丰富的胶原蛋白，胶原蛋白是动物体内最重要的蛋白质之一，具有特殊的机械性能和生物特性，近年来胶原蛋白做为一种新兴的材料已经广泛应用于医疗器材、药品、保健品等领域，而胶原多肽有着比胶原蛋白更加优良的生物活性和抗氧化性，也更易被人体吸收。随着对胶原类产品研究的深入，海洋来源的胶原蛋白作为健康产品基本原料优势非常明显，具备无动物免疫原性、无细胞毒性等特点，因此其必将成为最活跃、最具广阔前景的研究领域。

三、发明内容

胶原蛋白经复合蛋白酶降解处理后得到具有较高吸收性、分子量约100-10000Da的产物、即为胶原肽。胶原肽在反映蛋白质营养的同时，具备抗溃疡、抗氧化、抗过敏、抗衰老、降血压、促进伤口愈合、促进皮肤胶原代谢、免疫调节等特点，因此胶原肽具备更加优异的生物活性，其很多活性都与其抗氧化性有关。

四、具体实施方法

本发明的目的是提供一种从多棘海盘车体壁中提取制备胶原多肽的方法，该方法包括用蛋白酶从多棘海盘车体壁中提取胶原蛋白，再将胶原蛋白降解制备胶原多肽的过程。

1、海洋生物胶原蛋白提取制造方法

先将多棘海盘车体壁洗净用2％盐酸浸泡、使其脱骨，再用3％柠檬酸溶液酸溶胀，将溶胀后的多棘海盘车体壁均浆，4℃木瓜蛋白酶酶解24小时，离心机10000r/min离心，取上清液，再将沉淀物重复酶解2次以提高胶原提取率，合并3次上清液，用乙酸调节PH值＝7，用65％硫酸铵盐析得胶原沉淀，蒸馏水透析16h，得纯胶原蛋白液。

2、海洋生物胶原多肽提取制造方法

将胶原蛋白液溶于0.5mol/L乙酸中，用复合酶(风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶)酶解4h(酶料比为2∶1000)，置于95℃水浴中灭酶10min，4000r/min离心15min，得胶原肽溶液，真空冷冻干燥机-80℃真空冷冻干燥制成胶原多肽冻干粉制品。

五、海洋生物胶原多肽清除氧自由基能力测定

清除氧自由基能力测定采用邻苯三酚自氧化法。取胶原多肽样品溶液0.2ml，加入pH8.2、50mmol/L Tris-HCL缓冲液4.5mL，去离子水4mL，混均，25℃保温10min，作为甲液，取0.3mL用10mmol/L HCl溶液配制3mmol/L邻苯三酚溶液，25℃保温10min，作为乙液；以甲液与0.3mL 10mmol/L的HCl溶液的混合液作为空白调零后，将甲液与乙液迅速混合，在320nm处每30s测定吸光度，在4min内求吸光度变化斜率K₁。以蒸馏水代替胶原多肽样品作为对照样品重复上述过程，计算出吸光度变化的斜率。

六、海洋生物胶原多肽对小鼠体内抗氧化作用测定

通过建立小鼠酒精急性肝氧化模型研究胶原多肽对小鼠体内抗氧化作用。取昆明种小鼠，按体重分为6组，分别为正常对照组、VC阳性对照组、阴性对照(乙醇损伤)组、胶原多肽高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。其中，胶原多肽组分别给予低(50mg/kg·d)、中(100mg/kg·d)、高(200mg/kg·d)剂量，VC阳性对照组给予VC(75mg/kg·d)，正常对照组、阴性对照组给予等体积蒸馏水。连续7d，于末次给药后2小时，除空白对照组外，均给予50％酒精12mL/kg，建立急性乙醇肝氧化模型。断食12h后脱颈处死全部小鼠，取肝脏用冰冷生理盐水洗净后制备10％肝组织匀浆液，按试剂盒说明测定组织SOD、GSH-PX活性以及MDA含量。