[发明专利]一种用于护唇类化妆产品中沙门菌的检查方法与验证

说明书

技术领域

一种用于护唇类化妆产品中沙门菌的检查方法与验证，属于生物技术中食品、化妆品的病原菌检测技术领域。

背景技术

沙门氏菌是一种革兰阴性兼性厌氧菌，是重要的人畜共患肠道传染病病原菌，其传播途径主要为粪-口传播，大多数由食物传播，少数介水传播。世界上最大的一起沙门氏菌食物中毒是1953年于瑞典，由于食用猪肉而引起的鼠伤寒沙门氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡。由于沙门氏菌型、菌株不同，使人发病的菌量也不同，一般食入含10⁶～10⁷cfu/g沙门菌的食品即可发病。据报道，沙门氏菌病为欧盟第二大爆发频繁的人畜共患传染病。2005年，平均发病率为每10万人口发生38.2例。人畜感染沙门氏菌后可呈无症状带菌，也可表现为有临床症状的致死疾病，它可能加重病态或死亡率或者降低动物的繁殖生产力，给国家经济造成巨大损失，同时严重威胁着人民的身体健康。

护唇类化妆品如唇彩，唇膏，唇线笔，口红等系列产品，其组分配方中多含有角沙烷，胶原，尿囊素，软骨素硫酸等动物组织或提取物，由于其使用的特殊性，可能会有一部分被食入口中，引起细菌的感染。而沙门氏菌作为护唇类化妆品中主要的病原菌之一，可通过人、畜、禽类粪便或带菌接触，对人类具有明确的肠道致病意义，甚至也可导致局部感染，应对其进行方法学验证及检查。目前，在我国化妆品标准规范中，对这种含有动物组织包括提取物的护唇类产品，其微生物检验方法中却没有沙门氏菌的检验方法。国内、外的文献报道及专利记载中均没有护唇类化妆品中沙门氏菌的检验方法报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于护唇类化妆产品中沙门菌的检查方法与验证。

本发明的技术方案：一种用于护唇类化妆产品中沙门菌的检查方法与验证，所述的检测步骤如下：

1.1菌液制备方法  按《中国药典》2010年版二部附录微生物限度检查试验菌液的制备方法，取经30～35℃培养18～24小时的沙门菌营养肉汤新鲜培养物1ml，加入9ml质量体积百分比0.9％的无菌氯化钠溶液中，10倍稀释制成10～100cfu的菌悬液备用；

1.2试验组

1.2.1前增菌和增菌  取供试品10g，加入无菌聚山梨酯-80和无菌液体石蜡各10ml，研磨至粘稠状后加入70ml胰酪胨大豆肉汤培养基中混匀溶解，再加入试验用沙门氏菌悬液10～100cfu 1ml于36±1℃ 18～24小时培养，取10ml培养物加四硫磺酸钠煌绿增菌培养基(TTB)至100ml，42℃培养18～24小时；另取10ml培养物加氯化镁-孔雀绿沙氏增菌培养基(RVS)至100ml，36±1℃培养18～24小时；

1.2.2分离 取上述两种增菌培养物各1环，接种于1个亚硫酸铋琼脂培养基(BS)和1个Hektoen-肠道琼脂培养基(HE)平板上，36±1℃分别培养40～48小时(BS)和18～24小时(HE)，观察各平板上生长的菌落，结果Hektoen-肠道琼脂培养基(HE)平板上生长的菌落中心为黑色，亚硫酸铋琼脂培养基(BS)平板上生长的菌落为黑色且有金属光泽，菌落周围培养基为棕色或黑色；

1.2.3初步鉴定试验  从Hektoen-肠道琼脂培养基(HE)和亚硫酸铋琼脂培养基(BS)平板上各挑取2～3个菌落至三糖铁(TSI)琼脂斜面培养基上穿刺划线培养18～24小时，观察结果，Hektoen-肠道琼脂培养基(HE)和亚硫酸铋琼脂培养基(BS)平板上的培养物在三糖铁(TSI)琼脂斜面培养基上底层均为黑色，斜面和底层为黄色均产气(H₂S)；

1.2.4镜检  挑取三糖铁(TSI)琼脂斜面培养基上生长的疑似单个菌落接种至营养琼脂培养基平板上，于36±1℃18～24小时培养，做革兰染色镜检，观察，结果为革兰染色阴性无芽孢短杆菌；

1.2.5生化试验

(1)靛基质试验  挑取少量TSI三糖铁琼脂斜面上的培养物，接种于蛋白胨水培养基4ml/管中，于36±1℃培养1～2天，必要时可延长至4～5天，加入柯凡克试剂约0.5ml，轻摇，观察结果，试剂层呈无色；

(2)尿素酶试验  挑取少量TSI三糖铁琼脂斜面上的培养物，接种于尿素琼脂斜面培养基上，于36±1℃培养24小时，观察结果，培养基未产碱变色；