[发明专利]蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，包括DNA提取液、PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液包括第一反应液、第二反应液及石蜡，所述第一反应液中包括蜡样芽孢杆菌第一引物、蜡样芽孢杆菌第二引物、蜡样芽孢杆菌探针、阪崎肠杆菌正向引物、阪崎肠杆菌反向引物、阪崎肠杆菌探针、金黄色葡萄球菌第一引物、金黄色葡萄球菌第二引物、金黄色葡萄球菌探针，所述蜡样芽孢杆菌第一引物序列如SEQ ID NO：1所示，蜡样芽孢杆菌第二引物序列如SEQ ID NO：2所示，蜡样芽孢杆菌探针序列如SEQ ID NO：3所示，阪崎肠杆菌正向引物序列如SEQ ID NO：4所示，阪崎肠杆菌反向引物序列如SEQ ID NO：5所示，阪崎肠杆菌探针序列如SEQ ID NO：6所示，金黄色葡萄球菌第一引物序列如SEQ ID NO：7所示，金黄色葡萄球菌第二引物序列如SEQ ID NO：8所示，金黄色葡萄球菌探针序列如SEQ ID NO：9。

2.如权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述第一反应液和第二反应液通过所述石蜡分隔开。

3.如权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述第一反应液还包括灭菌超纯水、缓冲液、氯化镁、dNTPs。

4.如权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述第二反应液包括Taq酶、灭菌超纯水及显色剂。

5.如权利要求3或4所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述第一反应液各组分体积为：

6.如权利要求3或4所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述第二反应液各组分体积为：

Taq酶         0.15～0.3微升/管

显色剂        0.01～0.02微升/管

灭菌超纯水    1.68～1.84微升/管。

7.一种蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测方法，包括如下步骤：

提供蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌的DNA样品；

进行荧光定量PCR检测，所述荧光定量PCR检测步骤中使用如权利要求1-6任一项所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒。

8.如权利要求7所述的蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：

50-55℃：2-5min；

94-95℃：2-3min；

94-95℃：5-10S；

55-60℃：40-80S；

40循环。