[发明专利]蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒及检测方法。 

背景技术

蜡样芽胞杆菌是一种杆状、产生芽孢的革兰氏阳性细菌，由于蜡样芽胞杆菌自然界分布甚广，常存在于土壤、飞尘、腐草和空气中，极易在食品加工、运输、存储、销售过程中，通过苍蝇、蟑螂等昆虫和不卫生的用具和手污染。在临床上可导致脓肿、脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎等报道，但最常见的是导致不同类型的食物中毒：腹泻型和呕吐型。阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50％以上。金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌″的别称，是革兰氏阳性菌的代表。金黄色葡萄球菌致病力强弱主要取决于其产生的侵袭性酶和毒素，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。 

国际上通用的金黄色葡萄球菌采用培养检测如下： 

(1)样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。 

(2)增菌培养：将10-1稀释液接入7.5％NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37℃培养24小时。 

(3)分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37℃培养24～48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2～3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。 

(4)染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5～1μm。 

(5)血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1℃培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。 

(6)耐热核酸酶试验 

将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1℃培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。 

阪崎肠杆菌采用培养法检测如下： 

(1)前增菌和增菌 

取检样100g(mL)加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mL ST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。 

(2)分离 

轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃±1℃培养24h±2h。挑取1个～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25℃±1℃培养48h±4h。 

(3)鉴定 

自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。 

(4)结果与报告 

综合菌落形态和生化特征，报告每100g(mL)样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。 

根据上述通用方法，同时检测样品中蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌这三种细菌的周期长(至少48小时)、操作烦琐、灵敏度低、易污染、程序复杂和所需试剂(生化试验试剂和血清)繁多等缺点已远远不能满足快速检测蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌的要求。 

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌检测试剂盒，解决现有技术中同时检测蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌灵敏的低，周期长等技术问题，以及蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及金黄色葡萄球菌的检测方法。 

本发明是这样实现的，