[发明专利]哈维氏弧菌的荧光定量PCR快速检测方法无效
| 申请号： | 201210077647.5 | 申请日： | 2012-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN102618643A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 李正义;祝素珍;贾俊涛;唐静;房保海;赵丽青;马维兴 | 申请（专利权）人： | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266002 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 哈维 弧菌 荧光 定量 pcr 快速 检测 方法 | ||
1.一种快速检测哈维氏弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于首先提取TCBS平板上的可疑菌落的基因组DNA并稀释备用；再利用哈维氏弧菌保守性强的基因组DNA序列设计特异性引物和探针；最后使用该引物和探针对待测水产品TCBS平板上可疑菌落的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增和荧光信号的检测。其中所述的哈维氏弧菌特异性引物为：
上游引物Vharveyi-1：5′-GAGTTCGTATGGCGGGAGC-3′，
下游引物Vharveyi-2：5′-GTGCTGCTTCAGAAGATAGTG-3′
特异性TaqMan探针为：
Vharveyi-3：5′-TCCACTCTACGTAAAATGTTGA-3′
2.根据权利要求1所述的快速检测哈维氏弧菌的荧光定量PCR方法，其反应总体积为25μL，包括提取的基因组DNA，1μL；10×PCR buffer，2.5μL；Mg2+，2mmol/L；Taq酶2U；UNG酶1U；dNTP 0.2mmol/L；哈维氏弧菌特异性引物200nmol；TaqMan探针200nmol，最后加灭菌去离子水至25μL。
3.根据权利要求1所述的快速检测哈维氏弧菌的荧光定量PCR方法，其荧光定量PCR仪器的程序参数为：94℃预变性10min；94℃变性15s，60℃退火1min，同时收集FAM荧光，40个循环，40℃1min，4℃保存。
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