[发明专利]一种新型白果蛋白的制备和表征方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种新型白果蛋白的制备方法，尤其是白果蛋白的提取分离和结构表征技术。

二、背景技术

蛋白质是两性物质，在不同的pH值环境下可解离为正离子和负离子，而且具有各自的等电点。而使蛋白质稳定的基本因素是它分子表面的水化层与同性电荷的作用，若破坏这些因素即可促使蛋白质颗粒相互聚集而沉淀，这就是蛋白质盐析、等电点沉淀和有机溶剂分离沉淀法的基本原理。

蛋白质按其溶解度分类可分为：(1)清蛋白，溶于水及稀盐、稀酸或稀碱溶液，为饱和硫酸铵所沉淀；(2)球蛋白，溶于稀盐溶液，为半饱和硫酸铵所沉淀；(3)谷蛋白，不溶于水、醇及中性盐溶液，但易溶于稀酸或稀碱；(4)醇溶谷蛋白，不溶于水及无水乙醇，但溶于70～80％乙醇中；(5)组蛋白，溶于水及稀酸，但为稀氨水所沉淀，分子呈碱性；(6)鱼精蛋白，溶于水及稀酸，不溶于氨水；(7)硬蛋白，这类蛋白一般是动物体内做为结缔及保护功能的蛋白质，不溶于水、盐、稀酸或稀碱。

蛋白质按其结构和构象的不同可分为两大类，即纤维状蛋白质和球状蛋白质两大类。然后用适当的溶剂进行提取。如清蛋白可选择用水和盐溶液，球蛋白用盐溶液，组蛋白和谷蛋白等不溶于水或盐的可选择用稀酸或稀碱溶液。在提取的过程中，考虑到蛋白质受温度的影响会变性，一般选择常温搅拌提取、低温减压提取、超声波和微波辅助提取等。当获得蛋白质混合物提取液后，想要将所要的蛋白质与其它杂质初步分离开来，一般采用盐析等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。同时可采用离子交换层析、凝胶过滤、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，膜过滤分级的方法。

银杏树(Ginkgo Biloba L.)是落叶乔木中雌雄异株的裸子植物，原产于中国，素有“活化石”，“植物界的熊猫”之称。白果在我国食用、药用历史已有3000年之久。近十几年来，对银杏白果蛋白的研究取得了一定的进展。Uwe等在1989年从白果中分离出一种类似豆球蛋白的物质。牛卫宁等报道了从白果中提取得到的蛋白具有抗菌作用。黄文等应用不同的提取方法，分离出白果清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和碱溶蛋白等，发现白果中的蛋白质主要以清蛋白和球蛋白为主，其中白果清蛋白具有抗氧化和延缓衰老等作用。邓乾春等分离出一种新蛋白GAPIIa并对其进行氨基酸残基分析，指出氨基酸组成为脂肪族氨基酸残基占33.21％(共90个)，芳香族氨基酸残基占7.38％(共20个)，羟基氨基酸残基与含硫氨基酸残基占26.57％(共72个)，酸性氨基酸残基及其酰胺占23.61％(共64个)，碱性氨基酸残基占6.27％(共17个)。经证实GAP具有较明显的抗生物氧化活性。黄文等采用Halliwell方法对白果中不同蛋白清除羟基自由基(·OH)的能力进行了测定，相应的抑制率为清蛋白(50.84％)、球蛋白(24.09％)、醇溶蛋白(45.78％)、碱溶蛋白(41.33％)。邓乾春等探讨白果清蛋白(GAP)对正常小鼠的免疫调节作用。

由于白果蛋白具有很好的药食价值，随着我国银杏种植业规模的扩大，白果产量日益增加，需要开发具有高新技术含量的白果蛋白深加工产品。本发明专利重点研究白果蛋白质提取和分离方法，制备一种新型白果蛋白，为银杏产业的发展提供技术。

三、发明内容

技术问题：

蛋白质在提取分离过程中受外界因系影响会变性，本发明的技术难点在于提取白果蛋白的过程中保持蛋白的结构不变，制备高纯度的蛋白质，分离鉴定新型结构蛋白质。

技术方案：

本发明公开了一种新型白果蛋白的制备和表征方法，新鲜白果经脱脂和减压沸腾提取，分离富集蛋白belt1、蛋白belt2和蛋白belt3三个蛋白带。

为了实现本技术方案，本发明具体步骤如下：

第一步：新鲜白果在-10℃至-50℃下冷冻干燥，除去外壳和内衣，将果仁粉碎，得到含水重量百分比小于6％、粒度在10目-50目的白果粗粉。

第二步：用非极性溶剂与白果粗粉按质量比例4-30∶1(g/g)加入到脱脂釜萃取0.5～10小时，萃取温度-10℃至80℃，过滤，滤渣在室温通风下干燥，制备脱脂白果粉。

第三步：将脱脂白果粉加入到0.1-0.50mol/L NaCl盐溶液减压沸腾提取5～30min，提取溶剂pH8-9，提取温度20℃-75℃，脱脂白果粉与提取剂质量体积比例为1∶3-1∶30(g/ml)，提取次数2-6次，合并提取液。