[发明专利]卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒，其特征在于主要包括分别包被6种基因工程卵巢癌相关抗原和人免疫球蛋白IgG、IgM的八种荧光微球；所述6种基因工程卵巢癌相关抗原为TM4SF1、C1D、TIZ、OV-142、FXR1、OV-189，它们分别具有序列表中SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒，其特征在于：所述荧光微球为耦联羟基微球。

3.根据权利要求1所述卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于：取八种聚苯乙烯荧光微球分别包被具有序列表中SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的氨基酸序列的6种基因工程卵巢癌相关抗原TM4SF1、C1D、TIZ、OV-142、FXR1、OV-189和人免疫球蛋白IgG、IgM。

4.根据权利要求3所述卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：取八种聚苯乙烯荧光微球，6种基因工程卵巢癌相关抗原和人免疫球蛋白IgG、IgM各对应一种聚苯乙烯荧光微球；每种聚苯乙烯荧光微球各取2.5×10⁶个，经超声雾化和旋涡振荡充分重悬后，以0.1mol/L pH 6.2的NaH₂PO₄溶液作为活化缓冲液，洗涤2次后置于1.5ml Eppendorf管中，管中反应体系包括80μlNaH₂PO₄活化缓冲液、新鲜配制的浓度均为50g/L的表面活化剂Sulfo-NHS和EDC各10μl，室温下孵育20分钟进行微球表面的碳氧化学修饰以利于耦联；漂洗后的活化微球加入500μl含125μg相应抗原蛋白的0.05mol/L pH 5.0MES耦联缓冲液，振荡孵育后继而以200μl封闭/保存缓冲液PBS-TBN封闭微球表面的未结合位点，即得包被微球溶液。

5.根据权利要求4所述卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于：分别取八种所述包被微球溶液，以分析缓冲溶液按1∶5稀释后，在血球记数仪下计算微球浓度并调整其终浓度至1×10⁶/ml，4℃避光保存备用；所述分析缓冲溶液为含浓度0.1％BSA、0.01mol/L叠氮钠的0.01mol/L pH 7.4的PBS。

6.根据权利要求5所述卵巢癌相关抗原自身抗体谱液相芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述封闭/保存缓冲液PBS-TBN是含浓度0.1％BSA、0.02％Tween-20、0.05％NaN₃ pH 7.4的PBS。