[发明专利]复苏可培养化的VBNC节杆菌DSC4菌株及其复苏方法和应用

权利要求书

1.复苏可培养化的VBNC节杆菌DSC4（Arthrobacter sp. DSC4）菌株，该菌株的保藏编号为CCTCC No：M2011406，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉武汉大学，保藏日期为：2011年11月21日。

2.一种用于权利要求1所述的节杆菌DSC4菌株的活化培养基，其特征在于该培养基按重量百分比计有以下的组分构成：

营养肉汤培养基   1.0~3.0g ；  酵母膏0.2~0.5g；

葡萄糖           1.5~5.0 g；  琼脂1.0~4.0%；

含复活促进因子Rpf的复苏培养液2~20%，去离子水1000ml；

上述的百分比为占培养基总量的体积百分比。

3.根据权利要求2所述的节杆菌DSC4菌株的活化培养基，其特征在于含复活促进因子Rpf的复苏培养液由培养基基液、细菌液和土壤液构成；所述的细菌液由藤黄微球菌菌种在菌种液体培养基上培养至对数期后期，经离心去除菌种液体培养基提取获得蛋白质，含有复活促进因子Rpf，细菌液按体积比为培养基基液的1-10%；所述的土壤液由经风干、过筛、去除杂质的园土，加自来水，多次灭菌，过滤取滤液或离心取上清液，土壤液按体积比为培养基基液的1-5%。

4.权利要求2所述的节杆菌DSC4菌株的活化培养基配制方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：称取营养肉汤培养基1.0~3.0g，酵母膏0.2~0.5g，葡萄糖1.5~5.0g，去离子水1000ml，pH调至7.0，加1.0~4.0琼脂，经110~130℃、10~30min高压灭菌后冷却至室温；另在无菌条件下加入2~20 (v/v) 经0.22μm滤膜过滤灭菌、pH 7.0的复苏培养液，搅拌混匀，分注干固，倒置4-10℃保藏待用。

5.权利要求4所述的节杆菌DSC4菌株的活化培养基配制方法，其特征在于复苏培养液的制备方法如下：

1）取少量藤黄球菌菌种接种于菌种液体培养基，25~35?C、100~150rpm振动培养；细菌生长至对数期后期，培养液用3000~8000rpm，10~30min离心抽提去除菌体；经0.20~0.25μm膜过滤灭菌后，-30~-10℃保存备用；

2）取经风干、过筛、去除杂质的园土1kg，加自来水1~2L，110~130℃、10~40min高压灭菌锅灭菌；室温待一晚后，再度用同法灭菌；1500~2500r/min低速离心取上清液或用滤纸过滤弃渣获得滤液，经110~130℃、10~30min高压灭菌锅灭菌后冷却，-30~-10℃保存备用；

3）准确称取培养基基液的各组分，pH调至7.0，110~130℃、10~30min高压灭菌锅灭菌后冷却至室温待用；培养基基液适宜多数细菌的分离，对于有特殊要求以及有选择性的细菌可以相应加减营养组分；

4）使用前，在无菌条件下，培养基基液中加1-10%细菌液，再加1-5%土壤液，混匀后使用。

6.根据权利要求1所述的复苏可培养化的VBNC节杆菌DSC4菌株应用于含硝酸盐基质的反硝化脱氮。

7.含硝酸盐基质的反硝化脱氮方法，其特征在于：该方法将权利要求1所述的复苏可培养化的VBNC节杆菌DSC4菌株经活化培养、前培养后加入污水生物处理系统中。

8.根据权利要求4所述的含硝酸盐基质的反硝化脱氮方法，其特征在于：活化培养采用的培养基按重量百分比计由以下的组分构成：

营养肉汤培养基   1.0~3.0g ；  酵母膏0.2~0.5g；

葡萄糖           1.5~5.0 g；  琼脂1.0~4.0%；

含复活促进因子Rpf的复苏培养液10%，去离子水1000ml；

上述的百分比为占培养基总量的体积百分比。

9.根据权利要求4所述的含硝酸盐基质的反硝化脱氮方法，其特征在于：前培养采用的培养基按重量百分比计由以下的组分构成：

蛋白胨  3.0~8.0 g，   酵母膏0.2~0.8 g，

葡萄糖3.0 ~8.0 g，   NaCl 1.5~5.5 g，

1000ml去离子水，pH调至7.0。

10.一种污水生物处理系统，其特征在于：该污水生物处理系统中包括权利要求1所述的复苏可培养化的VBNC节杆菌DSC4菌株。