[发明专利]一种负载紫杉醇的囊泡的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种负载紫杉醇的囊泡的制备方法。 

背景技术

紫杉醇(paclitaxel，商品名Taxol)结构式如下： 

其是1963年美国化学家瓦尼(M.C.Wani)和沃尔(Monre E.Wall)首次从一种生长在美国西部大森林中称谓太平洋杉(Pacific Yew)树皮和木材中分离到了紫杉醇的粗提物。在筛选实验中，Wani和Wall发现紫杉醇粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有很高活性，并开始分离这种活性成份。由于该活性成份在植物中含量极低，直到1971年，他们才同杜克(Duke)大学的化学教授姆克法尔(Andre T.McPhail)合作，通过X-射线分析确定了该活性成份的化学结构——即一种四环二萜化合物，并把它命名为紫杉醇(taxol)。 

紫杉醇具有良好的抗癌活性，是第三代抗肿瘤药物。它对有丝分裂纺锤体具有毒性并且是有较强的细胞抑制性。紫杉醇具有很大的应用价值和经济效益。但它的广泛应用存在明显的缺陷：紫杉醇在水中的溶解度非常低(0.25μg/ml)，使用中需要加入助溶剂，但是助溶剂有很大的副作用，并且紫杉醇是非常复杂的天然化合物，前药合成难度很大。作为一种优秀的广谱抗癌药物，紫杉醇的应用受到极大限制。这是由于紫杉醇是一种疏水性很强的分子。目前临床上应用紫杉醇的途径是把紫杉醇溶解到乙醇与蓖麻油1∶1的混合溶液中，通过静脉注射到体内。由于血液是亲水环境，在循环过程中紫杉醇容易在血管内析出来阻塞血管，到不了癌细胞聚集处，造成对机体的伤害且效率较低。 

目前对紫杉醇增溶和运输的研究已有所开展，并取得了一定的成果，比如说利用无机物(主要包括铁系的氧化物)纳米颗粒来对紫杉醇进行包裹和运输。但是不可否认的是，仍然存在材料制备麻烦和效率不高等问题。因此，建立一种对机体友好、制备简便和高效率的输运体系是目前紫杉醇临床应用急需突破的课题。 

环糊精(cyclodextrin，简称CD)是由D型吡喃葡萄糖单元组成的大环分子，是一种广为人们所知的生物相容性的材料。蒽醌化合物，具有低毒性，在生活中广泛的用于染料制备。因此，环糊精蒽醌衍生物作为β-环糊精和喹啉偶联的化合物，可以作为一种安全低毒的载药体系。此外，由于蒽醌具有良好的荧光性能，在细胞吞噬掉含有蒽醌基团的自组装体后会在其内部产生较强的荧光现象。如果自组装体上负载有药物，我们就可以通过荧光显微镜来观测哪些细胞被“治疗”而哪些细胞未被“治疗”。这在正常细胞与癌变细胞的区别治疗 上将有着广阔应用。癌细胞有着非常强的分裂增生能力，体内少量的癌细胞即存在巨大的转移和增殖危险，因此，对全部癌细胞进行彻底杀灭是非常有必要的。 

囊泡(vesicle)作为一种重要的自组装纳米结构，是由一些特殊的分子构成的由一个双层膜或多层膜围起来的一种纳米空心球。近年来越来越多的在药物和基因传输，纳米反应器，细胞膜表面修饰等方面应用。基于环糊精的囊泡具有同时结合双层膜和主体大环分子的特性，环糊精分子在构成囊泡的同时能起到独立作用的主体分子识别作用。将紫杉醇负载到超分子囊泡体系上，为目前尚存在应用缺陷的紫杉醇提供了一个新的可实施的途径。 

发明内容

本发明的目的是提供一种水溶性抗癌药物新制剂——负载紫杉醇的囊泡的制备方法。 

本发明的技术方案是：由β-环糊精三步反应合成出环糊精蒽醌衍生物单[6-脱氧-N-乙基氨基-(N’-1-蒽醌)]-β-环糊精，并由该化合物在水溶液中自组装形成囊泡；然后将紫杉醇与环糊精蒽醌衍生物囊泡复合形成囊泡负载的紫杉醇制剂。 

本发明所述负载紫杉醇的囊泡的制备方法，步骤是： 

1)室温下将单[6-(2-胺乙基氨基)-6-脱氧]-β-环糊精加入到二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌至溶解，再加入所述β-环糊精摩尔数1.2～1.5倍量的1-硝基蒽醌，升温至90-140℃反应2-8小时，然后把反应物浸没于丙酮中，抽滤，收集沉淀，即得环糊精蒽醌衍生物粗品单[6-脱氧-N-乙基氨基-(N’-1-蒽醌)]-β-环糊精； 

2)将上述环糊精蒽醌衍生物粗品溶于水，使用凝胶色谱柱分离纯化，得到纯品单[6-脱氧-N-乙基氨基-(N’-1-蒽醌)]-β-环糊精； 

3)将步骤2)的产物按0.1-0.5g∶100mL的比例溶解到三蒸水中，然后超声10-60分钟，得到环糊精蒽醌衍生物囊泡溶液；