[发明专利]抗CD20的全人源单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗体药物的技术领域。具体地说，涉及一组全人源单克隆抗体新分子，其可用于淋巴瘤的诊断和治疗。

背景技术

1.CD20

CD20是一种分子量为33～37kDa的非糖基化磷蛋白，有4个跨膜区，氨基端和羧基端都位于细胞质膜内侧，在第三跨膜区和第四跨膜区之间，有一个由43个氨基酸残基组成的环区，构成其主要的抗原表位。作为B淋巴细胞表面分化抗原，它起始表达于pre-B细胞阶段，到B细胞终端分化成浆细胞时结束，一直被认为是B系细胞表面特有的标识。它主要参与调节B淋巴细胞的增殖与分化，在免疫系统起重要作用。80％～85％的非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)为B细胞来源，并且这些细胞的约95％均有表面CD20表达^[1，2]。CD20的表达因淋巴瘤细胞的不同而有所差异，滤泡性淋巴瘤细胞表面表达较高，小细胞淋巴瘤白血病细胞表面表达较低，在干细胞和浆细胞中不表达，慢性B淋巴白血病细胞中的表达远低于正常的B细胞和其他B淋巴瘤细胞，CD20的表达高低在一定程度上决定了抗体和补体杀伤瘤细胞的程度^[3]。单核细胞、静息以及激活的T细胞、裸细胞以及非淋巴细胞都不表达CD20分子。CD20与抗CD20抗体结合后内化现象不明显，细胞表面CD20分子数量并不因为与抗体结合而大量减少，CD20也不会发生明显细胞表面脱落的现象，因此，CD20是免疫治疗B细胞淋巴瘤的理想作用位点，特别是对治疗惰性、复发难治性B细胞淋巴瘤有较肯定的疗效。

2.治疗性抗CD20抗体

抗CD20治疗可清除恶性B细胞和部分正常B细胞，但由于干细胞和B细胞前体不表达CD20，因而不会造成长期B细胞损耗。其临床应用主要适应证为：1.单纯应用抗CD20单克隆抗体治疗滤泡性B细胞型非霍奇金淋巴瘤；2.抗CD20单克隆抗体与化疗联合应用治疗弥漫大B细胞型淋巴瘤及慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)。

2.1Rituximab(美罗华)

IDEC-C2B8，又名Rituximab，商品名为美罗华，1997年由FDA批准上市，是第一个被美国FDA批准用于治疗肿瘤的单克隆抗体^[4]。它是一个人鼠嵌合抗体，包含鼠源抗CD20单克隆抗体2B8(Ibritumomab)的可变区和人源IgG1重链及κ链的恒定区，用于B细胞淋巴瘤的治疗。Rituximab在体内通过抑制细胞增殖或触发多种细胞破坏机制，包括抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和补体依赖性细胞毒作用(CDC)以及细胞凋亡发挥明显的抗肿瘤功效^[5]。近年的临床研究证实，该药治疗谱较广，对B淋巴细胞性疾病均可取得较好的疗效。

2.2ZEVALIN

2002年2月，FDA批准了第一个放射性免疫治疗药物Zevalin。该药由IDEC制药公司生产，通用名Ibritumomab Tiuxetan。FDA批准此药用于治疗复发性或难治性低恶性度/滤泡性或转化的B细胞NHL，其中包括Rituximab难治性的滤泡性NHL。该产品由小鼠IgG1-κ单克隆抗体2B8(Ibritumomab)连接同位素⁹⁰Y用于肿瘤治疗。其单抗部分对CD20具有高的特异亲和性^[6]。

2.3BEXXAR

2003年6月27日，FDA批准Bexxar(Tositumomab和¹³¹I Tositumomab)用于治疗癌细胞已经或未发生转移、对Rituximab有耐药性、化疗后又复发的CD20阳性滤泡性NHL。它由鼠源单克隆抗体-抗Bl单克隆抗体(Tositumomab，IgG2a-λ)与放射性同位素¹³¹I共价偶联而成。

2.4ARZERA

2009年10月26日，FDA批准ARZERA(Ofatumumab)用于治疗慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。它由KM人源转基因鼠免疫通过杂交瘤技术产生的人单克隆抗体。和Rituximab相似其在体内通过抑制细胞增殖或触发多种细胞破坏机制，包括抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和补体依赖性细胞毒作用(CDC)以及细胞凋亡发挥明显的抗肿瘤功效。但其在治疗非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的三期临床试验失败。目前其主要用于对一线化疗药物耐受的慢性淋巴细胞性白血病。

3.Rituximab在临床的应用

3.1单独应用治疗非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)