[发明专利]一种新的分枝杆菌菌种快速鉴定方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中包括两对引物和三条探针，所述两对引物包括引物TBleft1、TBleft2、TBright1和TBright2，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示，所述三条探针TBProbe1、TBProbe2、TBProbe3的5’端用报告荧光染料标记，3’端用淬灭荧光染料标记，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15所示。

2.权利要求1所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其进一步还包括另外四对引物和三条探针，所述四对引物包括引物TBleft3、TBleft4、TBright3、TBright4、TBleft5、TBleft6、TBright5、TBright6，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12所示，所述三条探针TBProbe4、TBProbe5、TBProbe6的5’端用报告荧光染料标记，3’端用淬灭荧光染料标记，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18所示。

3.权利要求1或2所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中所述的报告荧光染料选自FAM、ROX、HEX或JOE。

4.权利要求1或2所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中所述的淬灭荧光染料选自BHQ1、BHQ2、Eclipse或TAMRA。

5.权利要求1或2所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中探针TBProbe1、TBProbe2、TBProbe3的5’端分别用报告荧光染料FAM、HEX、ROX标记，3’端分别用淬灭荧光染料BHQ1或BHQ2标记。

6.权利要求1、2或5所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中探针TBProbe4、TBProbe5、TBProbe6的5’端分别用报告荧光染料FAM、ROX、HEX标记，3’端分别用淬灭荧光染料BHQ1或BHQ2标记。

7.权利要求1至6中任一项所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中所述的分枝杆菌为临床常见分枝杆菌，包括但不限于结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、瘰疬分枝杆菌(M.scrofulaceum)、猿猴分枝杆菌(M.simiae)、胃分枝杆菌(M.gastri)、海分枝杆菌(M.marinum)、溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)、不产色分枝杆菌(M.nonchromogenicum)、爱知分枝杆菌(M.aichiense)、鸟分枝杆菌(M.avium)、迪氏分枝杆菌(M.diernhoferi)、次要分枝杆菌(M.triviale)、偶然分枝杆菌(M.fortuitum)、土地分枝杆菌(M.terrae)、胞内分枝杆菌(M.intracellulare)、戈登分枝杆菌(M.gordonae)、蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)、龟分枝杆菌龟亚种(M.chelonae subsp.chelonae)、龟分枝杆菌脓肿亚种(M.chelonae subsp.abscessus)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)、抗热分枝杆菌(M.thermoresistibile)、田野分枝杆菌(M.agri)、母牛分枝杆菌(M.vaccae)、草分枝杆菌(M.phlei)。

8.权利要求1至7中任一项所述的用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，进一步还包括热稳定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶及核酸序列扩增所需的其它各种试剂。

9.一种用于鉴定分枝杆菌菌种的方法，该方法包括：

(1)样本处理及DNA提取；

(2)配制包括权利要求1或2所述试剂盒中引物对和探针的PCR反应体系；

(3)在荧光定量PCR仪上进行PCR扩增；

(4)PCR扩增结束后，进行熔解曲线(Melting curve)分析。