[发明专利]一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法

权利要求书

1.一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法，其特征在于，是将候选品系的基因组DNA经特定引物HIPS-TC扩增，并在电泳分析后采用NTSYSpc2.1软件构建藻株间的聚类图；若候选品系具有1130bp、620bp、580bp和540bp的特异DNA电泳条带，且能与已知生产性状好的品系聚到一起，则候选品系生产性状好，适用于大规模培植生产；若候选品系具有1190bp、780bp、700bp、570bp、520bp和470bp的特异DNA电泳条带，且与已知生产性状差的品系聚到一起，则生产性状差，不适用于大规模培植生产；

所述特定引物HIPS-TC的序列为5’-GCGATCGCTC-3’；

所述生产性状好的品系是：ZJU0103、ZJU0104、ZJU0105、ZJU0107、ZJU0108、ZJU0115和ZJU0116；所述生产性状差的品系是：ZJU0101、ZJU0102、ZJU0106、ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0113和ZJU0114。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括下述步骤：

(1)选用14种螺旋藻品系作为对比样本，即ZJU0101、ZJU0102、ZJU0103、ZJU0104、ZJU0105、ZJU0106、ZJU0107、ZJU0108、ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0113、ZJU0114、ZJU0115和ZJU0116；

(2)试剂和仪器

TaqDNA聚合酶和琼脂糖为上海生工生物工程公司产品；dNTP、DNA限制性内切酶、RNase A均为日本TaKaRa公司产品；其它试剂均为分析纯；序列扩增用美国Hybaid公司的Thermal Cycler PCR仪；

(3)PCR扩增

将候选品系及14种对比样本的基因组DNA经特定引物HIPS-TC扩增；

在25μL PCR反应体系中，含10倍的PCR缓冲液2.5μL，4种dNTP各1μmol/L，特定引物HIPS-TC：5’-GCGATCGCTC-3’0.5μmol/L，1.25U的Taq DNA聚合酶，100ng基因组DNA，PCR反应程序为94℃ 5min；94℃ 30s，30℃ 50s，72℃ 45s，30个循环；最后72℃延伸10min；

(4)电泳分析和观察

将扩增产物在5％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，电压8.5V/cm；电泳结束后用银染方法染色，再在凝胶成像系统Bio-Rad观察并照相，经过观察比对被筛选的螺旋藻品系用引物HIPS-TC扩增出条带的分子量；

(5)聚类图的构建

对上述候选品系及14种对比样本的电泳结果采用NTSYSpc2.1软件以非加权平均法进行分析和构建藻株间的聚类图，并根据聚类情况进行判断。