[发明专利]一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法

说明书

技术领域

本发明属于螺旋藻开发应用的技术，特别涉及一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法。

背景技术

螺旋藻(Spirulina)，是一种光合放氧、呈规则螺旋的原核丝状微藻，系蓝藻门(Cyanophyta)、颤藻目(Oscillatoriales)、颤藻科(Oscillatoriaceae)的一个属[武汉植物学研究，1997，15(4)：369-374]。因富含优质蛋白和多种生物活性物质而受到国内外的极大关注，并已在大量研究的基础上形成了庞大的螺旋藻产业，成为目前全球研究开发规模最大，应用前景最广泛的经济微藻。值得指出的是，众多的实验研究与长期的生产实践表明，螺旋藻不同品种(系)，对温度、光质、光照强度，以及培养液的盐度、pH和营养成分等环境因子的要求与适应性存在显著差异，由此产生的经济效益也相差甚远[水生生物学报，1999，23(1)：59-64]。所以，与其它农业与生物技术产业一样，选育品性兼优的品种(系)是有效提升当前螺旋藻产业经济效益、切实解决生产实际问题，最直接而重要的途径之一。

目前国内外筛选适合大规模生产螺旋藻品种(系)的一般常规方法如下：1、对新分离到的品种(系)进行编号；2、在实验室条件下作多种环境因子的交叉组合培养试验，并根据所测定的生长曲线、光合放氧、生化组成等指标作初步筛选；3、对实验室初筛到有生产养殖潜力的候选品种(系)在不同季节、气候及营养条件下进行养殖小试、中试与生产性试验，再筛选出目标品种(系)。这一方法虽然实用、有效，但程序繁琐、工作量大、周期长、成本高。因此，迫切需要建立简单、快速、有效的评价与筛选方法，以满足当前国内外螺旋藻产业不断发展的实际需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种简单、快速、低成本有效的一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法。

为解决技术问题，本发明的解决方案是：

提供一种鉴别螺旋藻生产性状优良品系的方法，是将候选品系的基因组DNA经特定引物HIPS-TC扩增，并在电泳分析后采用NTSYSpc2.1软件构建藻株间的聚类图；若候选品系具有1130bp、620bp、580bp和540bp的特异DNA电泳条带，且能与已知生产性状好的品系聚到一起，则候选品系生产性状好，适用于大规模培植生产；若候选品系具有1190bp、780bp、700bp、570bp、520bp和470bp的特异DNA电泳条带，且与已知生产性状差的品系聚到一起，则生产性状差，不适用于大规模培植生产；

所述特定引物HIPS-TC的序列为5’-GCGATCGCTC-3’(SEQ ID NO：1)；

所述生产性状好的品系是：ZJU0103、ZJU0104、ZJU0105、ZJU0107、ZJU0108、ZJU0115和ZJU0116；所述生产性状差的品系是：ZJU0101、ZJU0102、ZJU0106、ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0113和ZJU0114。

该方法具体包括下述步骤：

(1)选用14种螺旋藻品系作为对比样本，即ZJU0101、ZJU0102、ZJU0103、ZJU0104、ZJU0105、ZJU0106、ZJU0107、ZJU0108、ZJU0109/RH、ZJU0110、ZJU0113、ZJU0114、ZJU0115和ZJU0116；

(2)试剂和仪器

TaqDNA聚合酶和琼脂糖为上海生工生物工程公司产品；dNTP、DNA限制性内切酶、RNase A均为日本TaKaRa公司产品；其它试剂均为分析纯；序列扩增用美国Hybaid公司的Thermal Cycler PCR仪；

(3)PCR扩增

将候选品系及14种对比样本的基因组DNA经特定引物HIPS-TC扩增；

在25μL PCR反应体系中，含10倍的PCR缓冲液2.5μL，4种dNTP各1μmol/L，特定引物HIPS-TC：5’-GCGATCGCTC-3’0.5μmol/L，1.25U的Taq DNA聚合酶，100ng基因组DNA，PCR反应程序为94℃ 5min；94℃ 30s，30℃ 50s，72℃ 45s，30个循环；最后72℃延伸10min；

(4)电泳分析和观察