[发明专利]一种基于固相载体进行扩增及进行核酸测序的方法

权利要求书

1.一种基于固相载体进行扩增的方法，所述固相载体的表面固定有至少一个模板序列，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A.将引物结合于固相载体表面上的引物结合位点，得到固定有引物的扩增载体；

B.对扩增载体上的模板序列进行扩增，得到扩增产物。

2.根据权利要求1所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，步骤A所述引物包括用于对所述模板序列进行扩增的上游引物和/或下游引物，所述上游引物是与模板序列5’端互补结合的核酸序列，所述下游引物是与模板序列3’端序列相同的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，步骤B中所述的扩增方式是单分子扩增。

4.根据权利要求3所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，所述单分子扩增方式包括乳液PCR扩增、滚环扩增和桥式PCR扩增的任一种。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，所述引物结合于固相载体表面的方式为：

引物与固相载体表面携带的基团进行配对连接，实现直接结合；

或通过连接子携带的基团分别与引物和固相载体表面携带的基团进行配对连接，实现间接结合。

6.根据权利要求5所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，所述配对连接的方式采用生物素-亲和素/链霉亲和素、纳米金/碘乙酰-巯基、氨基-醛基/羧基/异硫氰基、丙烯酰胺-硅烷基/聚丙烯酰胺中的至少一种。

7.根据权利要求5所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，所述固相载体的材质采用玻璃、硅胶、陶瓷、塑料和金属中的至少一种。

8.根据权利要求5所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，在步骤A之前还包括步骤：

A0.将模板序列通过基团配对方式结合于固相载体表面，得到固定有至少一个模板序列的固相载体。

9.根据权利要求8所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于：

所述引物及模板序列与固相载体采用不同的基团配对进行结合，所述固相载体表面或连接子带有至少两种基团。

10.根据权利要求1所述的基于固相载体进行扩增的方法，其特征在于，步骤B之后还包括步骤：

B’.对扩增产物进行纯化回收。

11.一种基于固相载体进行核酸测序的方法，所述固相载体固定有至少一个模板序列，其特征在于，所述核酸测序的方法包括以下步骤：

A.将引物结合于固相载体表面上的引物结合位点，得到固定有引物的扩增载体；

B.对扩增载体上的模板序列进行扩增，得到扩增产物；

C.根据碱基互补原则对扩增产物进行核酸测序，得核酸序列信息。

12.根据权利要求11所述的基于固相载体进行核酸测序的方法，其特征在于，步骤A中所述引物包括肿瘤类易感基因引物、心血管疾病类易感基因引物、营养指导基因引物和单基因疾病检测引物中的任一种。

13.根据权利要求11所述的基于固相载体进行核酸测序的方法，其特征在于，所述步骤C包括以下步骤：

C1.将扩增产物变性形成单链，得固定于固相载体的单链核酸片段；

C2.根据碱基互补原则对单链核酸片段进行核酸测序，得核酸序列信息。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的基于固相载体进行核酸测序的方法，其特征在于，所述核酸测序的方法是大规模循环平行测序的方法。

15.根据权利要求14所述的基于固相载体进行核酸测序的方法，其特征在于，所述大规模循环平行测序的方法为基于聚合酶合成为基础的合成测序法，或者是基于络合连接为基础的连接测序法。