[发明专利]一种真菌发酵产物的制备方法及在水稻病害防治中的应用

权利要求书

1.一种真菌发酵产物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括：

1)液体培养及发酵产物处理：将真菌Agrocybe sp.YB2005活化后进行液体深层发酵，液体深层发酵的培养基配方按重量比为：马铃薯16-25%，葡萄糖1.5-2.5%，蛋白胨0.3-0.7%，余量为水，pH自然，0.1Mpa、121℃灭菌30min，置于25－28℃，180－230r/min恒温摇床中培养7-12天；发酵结束后，用离心法将菌丝体与发酵液分离，发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经脱水、浓缩，得到有机粗提物浸膏；

2)产物分离：将1)所述的有机粗提物浸膏用甲醇溶解，经凝胶柱层析，甲醇为洗脱剂，洗脱液用TLC-生物自显影法测定抗菌活性物质，合并具有活性的组分，将活性组分用甲醇溶解，进行反相硅胶柱层析，用不同梯度甲醇-水洗脱，洗脱液用TLC-生物自显影法活性追踪，收集活性组分，接着上硅胶柱，用石油醚-丙酮梯度洗脱，TLC-生物自显影法收集活性组分得到具有抗菌活性的产物即为真菌发酵产物；

所述于真菌Agrocybe sp.YB2005已于2012年3月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：2012076。

2.根据权利要求1所述的真菌发酵产物的制备方法，其特征在于：所述液体深层发酵的培养基配方按重量比为：马铃薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，余量为水。

3.根据权利要求1所述的真菌发酵产物的制备方法，其特征在于：所述TLC-生物自显影法中，TLC采用氯仿：甲醇体积比为为10：1的展开剂；具体操作为：点样后在展开剂中展开，然后将薄层板反盖在混有水稻细条病病原菌的培养平板上，20分钟后，移走薄层板，将培养平板置于28℃培养，3天后观察抑菌情况。

4.根据权利要求1所述的真菌发酵产物的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述用不同梯度甲醇-水洗脱，其中甲醇所占体积比分别为：10%、20%、30%、40%、50%。

5.根据权利要求1所述的真菌发酵产物的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述硅胶柱采用石油醚-丙酮体积比分别为7:1、6:1、5:1的梯度洗脱。

6.如权利要求1-5中任一条所述的真菌发酵产物在水稻病害防治中的应用。

7.根据权利要求6所述的真菌发酵产物的应用，其特征在于：所述水稻病害为水稻稻瘟病、水稻纹枯病或水稻细条病。