[发明专利]一种秸秆饲料的制备方法

权利要求书

1.一种秸秆饲料的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）菌种采集：采集堆放在田间自然腐烂的油菜秸秆；

（2）菌种分离：将油菜秸秆浸泡后稀释，取稀释液涂布在马丁氏培养基上于25℃培养5～7d，继续用马丁氏培养基分离纯化菌种至无污染，筛选D/d值大于2的菌落即为菌种；

（3）菌液培养：取少量步骤（2）得到的菌种接种于马丁氏液体培养基上摇床培养制得菌液；

（4）秸秆发酵：取菌液20～100ml、秸秆渣150～250g、蔗糖15～25g和蒸馏水100～150ml，混匀发酵，即得秸秆饲料。

2.按照权利要求1所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：

（1）菌种采集：采集堆放在田间300天以上并自然腐烂的油菜秸秆；

（2）菌种分离：将油菜秸秆与水按1:8～12的质量比混合浸泡20～28h后稀释至1O^-4倍，取稀释液0.1mL涂布在8～12ml马丁氏培养基上，于25℃培养5～7d，继续用马丁氏培养基分离纯化菌种至无污染，筛选D/d值大于2的菌落即为菌种；

（3）菌液培养：用0.3cm打孔器取步骤（2）得到的菌种接种于45～55ml马丁氏液态培养基中，于25℃、110～130r/min摇床培养70～74h，再取20%的培养产物接种于80～120ml马丁氏液态培养基中制得菌液；

（4）秸秆发酵：取菌液20～100ml、秸秆渣200g、蔗糖20g和蒸馏水120ml，混匀，置于25～28℃条件下发酵15～20d即可。

3.按照权利要求2所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：所述菌种分离为：将油菜秸秆与水按1:10的质量比混合浸泡24h后稀释至1O^-4倍，取稀释液0.1mL涂布在10ml马丁氏培养基上，于25℃培养5～7d，继续用马丁氏培养基分离纯化菌种至无污染，筛选D/d值大于2的菌落即为菌种。

4.按照权利要求2所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：所述菌液培养为：用0.3cm打孔器取步骤（2）得到的菌种接种于50ml马丁氏液态培养基中，于25℃、120r/min摇床培养72h，再取20%的培养产物接种于100ml马丁氏液态培养基中制得菌液。

5.按照权利要求1、2或3所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：在所述马丁氏培养基中按250ml马丁氏培养基加入15～25mg青霉素和25～35mg链霉素的比例加入青霉素和链霉素。

6.按照权利要求5所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：所述青霉素和链霉素的加入量分别为20mg和30mg。

7.按照权利要求1、2或4所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：在所述马丁氏液态培养基中按250ml马丁氏液态培养基加入15～25mg青霉素和25～35mg链霉素的比例加入青霉素和链霉素。

8.按照权利要求7所述秸秆饲料的制备方法，其特征在于：所述青霉素和链霉素的加入量分别为20mg和30mg。