[发明专利]一种降解高盐度废水酚转基因细菌的培养以及应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种降解高盐度废水酚转基因细菌的培养以及应用方法，具体涉及一种降解20%以上盐浓度废水酚转基因细菌的培养属于污水处理领域。 

背景技术

由于淡水资源越来越紧缺，为了缓解这种局面，在一些沿海城市开始推行直接利用海水资源。将海水广泛应用于电力、化工、机械、建筑、印染及食品等行业，将其作为工业冷却水、工业生产用水，因此产生了高盐度的含酚废水。

  高盐度含酚废水流入渠道，江河，湖泊污染地表水，会导致水生动植物的死亡甚至绝迹；可能渗透到地下，污染地下水，如果周边居民采用被污染的地表水或地下水作为生活用水，会危害身体健康，重者死亡；还可能渗入土壤，造成土壤污染，影响植物和土壤中微生物的生长，还会被动植物的摄食和吸收作用残留在体内，而后通过食物链到达人体内，对人体造成危害。

现阶段处理高盐度含酚废水主要有物理，化学，生物3种方法。物理方法主要有电解工艺、膜分离工艺、加热蒸发等例如：公告号为 CN101259519、名称为“一种用于生产覆膜砂的除酚装置及其工作方法”所述是利用加热器加热空气然后使酚汽化。化学方法主要有电化学工艺，光催化氧化，湿式催化氧化，臭氧氧化等。例如：公告号为CN101269841、名称为“除酚用锰氧化物及其处理高浓度含酚废水的方法”所述是利用锰氧化物Mn²⁺在酸性环境中将酚化合物氧化降解的化学方法。生物方法有传统活性污泥工艺，微生物处理等。传统活性污泥工艺经济实用但其只在4.5%盐浓度下对去除酚类物质有良好效果，微生物处理对盐浓度有很高的要求，例如：公告号为CN101768564A、名称为“一种高效降酚嗜盐菌的制备及其应用”嗜盐菌可以处理盐浓度5%~6%的废水中的酚而不能处理6%盐浓度以上的废水中的酚。而在C.R.Woolard “降解高盐度废水酚的批反应堆”的实验中经过7个月的时间，15%盐浓度废水中酚的去除率达到了99%。物理和化学方法的运营成本太高，不经济。而生物方法又受到了废水盐浓度的限制，不能降解大于20%盐浓度废水中的酚。

发明内容

本发明主要是针对生物方法不能降解大于20%盐浓度废水中酚的问题，提供了一种能够降解大于20%盐浓度废水中酚的转基因细菌的制备方法，通过该方法制备的酚转基因细菌，对含盐量为20%~25%的废水中酚的去除率达到99%以上。

  本发明转基因细菌把经过饱和盐水处理，然后电击，高温加热后的嗜盐菌中的嗜盐基因导入了降酚细菌中，得到了一种降酚嗜盐菌，克服了生物法不能处理大于20%盐浓度废水中的酚。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

（1）以盐碱土壤为嗜盐菌菌源,在温度为35~ 40°C，pH 7.5～8.5条件下用MGM培养基进行筛选培养2～3d，作为嗜盐菌菌源，冷藏保存；

（2）以黄河水为细菌菌源，在温度35~37°C ，pH7.0～8.0条件下用苯酚培养基进行筛选培养16～24h，作为降酚细菌菌源，冷藏保存；

（3）把嗜盐菌放入饱和盐水中，电击6-8h，然后加热到60~70℃，加热3～5min，得到混合液，待冷却后PEG沉降，去除沉淀，保留上清液；

（4）用CaCl₂溶液处理降酚细菌，然后把降酚细菌加入上清液中，涂抹于苯酚培养基上，在温度为35~37°C 条件下培养6-7d，作为转基因细菌菌源；

（5）把得到的转基因细菌涂抹于改良的苯酚培养基上在温度为35~ 40°C ，pH 7.5～8.5条件下培养3-4d筛选出酚嗜盐菌。

所述的MGM培养基中以质量百分比计，含有牛肉膏0.2%~0.5%，蛋白胨1%~3%，NaCl 20%~25%，琼脂 1%~3%，CaCl₂ 0.1%~0.3%，甘油1%~3%，酵母提取物 1%~3%，饱和食盐水65%~75%。

所述的苯酚培养基中以质量百分比计，含有放线菌酚 1%~ 2% ，NaCl 2%~5%，延胡索酸铁2%~ 5%，甘露醇1%～3%，苯酚 10%~30%，蛋白胨1%~3%，饱和盐水57%~79%。

所述的改良苯酚培养基中以质量百分比计，含有放线菌酚 1%~ 2% ，NaCl 15%~20%，延胡索酸铁2%~ 5%，甘露醇1%～ 3%，苯酚 10%~30%，蛋白胨1%~3%，饱和盐水40%~65%。

本发明与现有方法相比所具有的优点及效果是：

（1）本发明的转基因细菌可以降解20%～25%盐浓度废水中的酚；