[发明专利]一种有机法制备硒化黄芪多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硒化多糖的制备方法，尤其涉及一种有机法制备硒化黄芪多糖的方法。 

背景技术

在过去的几十年中，抗生素作为饲料添加剂在畜禽疾病防治，提高动物生产性能方面起到了重要作用。但是，抗生素类添加剂长期使用，导致其产生抗药性和畜产品中的药物残留通过食物残留，通过事物食物链直接影响人类健康，而且会给人类的疾病防治带来困难。 

黄芪不但是一味免疫增强剂及具有杀菌、抗病毒等药理作用的良药，而且是一味具有促生长、提高生产效率的畜禽饲料添加剂。 

黄芪( Astragalus)是豆科植物中常用中草药，黄芪多糖(Astragalus Polysacharin，APS)是黄芪中最重要的天然有效成分，是黄芪药理作用中起决定性因素的一类大分子化合物，具有促进免疫器官功能和抗体生成，抗菌抗病毒和抗肿瘤，防哀老及抗辐射，双向调节血糖等作用。自1981年黄芪多糖被提取分离以来，研究报道不断增多，作用范围日益扩大，对黄芪多糖的研究引起了人们的极大关注。但是传统黄芪多糖的提取工艺得到多糖粗品的收率极低，加上提取成本很高，使得黄芪多糖的开发利用受到限制。 

硒是动物必需的微量元素，而若干多糖又具有显著的生物活性，硒与黄芪多糖的结合，具有双重功效，可提高黄芪多糖的生物学功能，尤其可提高动物免疫功能。从天然黄芪等样品中提取出的多糖含硒量很低，通常<10 ug/g这样低的含硒量不能满足人们的要求。 

CN1560088A公开了一种硒化葡甘聚糖的制备方法，在一种Se6+溶液中加入乙醇和盐酸，制成硒化反应液，然后加入葡甘聚糖，制成硒化葡甘聚糖，硒含量为125.4～197.3ug/g。 

CN200910162003.4公开了一种有机法制备硒化多糖的方法，该方法是以蕨麻多糖或沙蒿多糖为原料，利用亚硒酸和氯化亚砜合成的一种硒化试剂，制备硒化多糖的一种方法。 

然而以上专利制备硒多糖的硒化剂使用量较大、硒化反应时间较长、含硒量不高、生物学效价低。 

CN101654486A公开了一种硒化黄芪多糖的制备方法，该方法将黄芪多糖加入到吡啶中，然后添加含硒试剂SeOC1₂反应一段时间，再用无水乙醇洗涤，沉淀离心，真空冷冻干燥，得到硒化黄芪多糖，产物中硒含量为15950ug/g。 

然而该方法未涉及如何提取得率较高的黄芪多糖，并且制备的硒化黄芪多糖稳定性不高。 

发明内容

本发明的目的是提供一种黄芪多糖得率较高、硒化剂使用量较小、硒化反应时间较短、含硒量高、稳定性高、生物学效价高的硒化黄芪多糖的制备方法。 

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的： 

一种有机法制备硒化黄芪多糖的方法，包括以下步骤： 1）从黄芪粗粉中制备黄芪多糖提取液；

2）将步骤1）所得的黄芪多糖提取液进行分离得黄芪多糖粗品；

3）将步骤2）所得的黄芪多糖粗品纯化：采用中性蛋白酶将步骤2）所得的黄芪多糖粗品在40～60℃酶解30～60min，沸水浴6～9min灭酶，冷却至室温后，离心，除去变性酶沉淀，然后上柱、将洗脱液蒸干后得黄芪多糖纯品；

4）将步骤3）所得的黄芪多糖纯品硒化：

① 合成硒含量为1.5～3.8%的含硒试剂氯化亚硒酰（SeOC1₂）；

 将黄芪多糖纯品加入到脱水吡啶中，搅拌分散均匀；然后滴入氯化亚硒酰和丁二酸，充分搅拌后加入钠含量为6～15%的硝酸钠溶液，在常温下硒化反应12～20h得悬浊液A，每千克所述黄芪多糖纯品的氯化亚硒酰用量为0.5～3L，每千克所述黄芪多糖纯品的吡啶用量为6～8L，每千克所述黄芪多糖纯品的丁二酸用量为0.3～0.5L；

③ 在悬浊液A中加入硫酸，搅拌6～9h，再用浓度为70～90%的无水乙醇沉淀离心2～5次；

④ 用水溶解沉淀后透析8～10h；

⑤ 再用无水乙醇沉淀离心，真空冷冻，用四氯化碳干燥后得粉末状硒化黄芪多糖。

本发明步骤3）中采用酶法脱除多糖中的蛋白可提高糖含量和黄芪多糖得率，步骤4中加入丁二酸作为硒化反应的催化剂可减少硒化剂用量，缩短硒化反应时间，加入硝酸钠作为硒化黄芪多糖的化学稳定剂，采用化学保护方式，减少硒活化功能，提高硒化黄芪多糖的稳定性；而本发明的含硒试剂与黄芪多糖在步骤4的各关联条件下可制得含硒量较高的硒化黄芪多糖，生物学效价更高。