[发明专利]一种安全快速从血液中提取基因组DNA的方法

说明书

技术领域：

本发明公开一种安全快速从血液中提取基因组DNA的方法，涉及血液总DNA制备技术，属于动物分子生物学技术研究领域。

背景技术：

基因组DNA (genomic DNA)是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，是进行基因操作的主要物质基础，在基因组学研究中占有重要地位。脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid，DNA)一类带有遗传信息的生物大分子，由4种主要的脱氧核苷酸(dAMP、dGMP、dCMT和dTMP)通过3′,5′-磷酸二酯键连接而成。它们的组成和排列不同，显示不同的生物功能，如编码功能、复制和转录的调控功能等。为了进行测序、杂交和基因的表达，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提。

DNA的提取是分子生物学研究中的基本技术，DNA样品的质量对实验的成败至关重要。经典方法中，从样品溶液中去除蛋白质采用酚/仿抽提，其标准程序是酚抽提一次，酚/仿抽提一次，氯仿抽提一次，有些情况下还要重复几次，这样就大大增加了工作量。同时，酚具有高度腐蚀性，易引起严重的烧伤；氯仿则作用于中枢神经系统，具有麻醉作用，对心、肝、肾有损害，吸入或经皮肤吸收引起急性中毒。所以，传统的操作方法对操作人员的身体伤害非常大。

目前，虽然有相关的试剂盒，但是其中大部分均含有对身体不利的有毒有害物质。

发明内容：

本发明提供一种安全快速从血液中提取基因组DNA的方法，克服了现在常用的方法中有害溶剂对人体危害的影响，具有提取的基因组DNA质量良好、且省时省力、降低成本等特点。

本发明公开的安全快速从血液中提取基因组DNA的方法，采用以下技术方案：

利用Triton X-100和SDS裂解血细胞，而无需蛋白酶K的处理，缩短了消化的时间、节约了实验的成本；利用饱和NaCl沉淀蛋白质，通过离心使蛋白质分离出去，这就避免了有机溶剂对人体的危害和对环境造成污染。

具体步骤如下：

（1）取200-300 份抗凝血和400-500 份低盐缓冲液加入1.5 ml离心管中，充分混匀，室温下1 000-1500 RPM离心8-12 min，弃上清；

（2）加入400-500 份低盐缓冲液，充分混匀，室温下1 000-1500 RPM离心3-8 min，重复上一步骤；

（3）小心吸出上清，加入300 份细胞裂解液，移液器吹打混匀，60-70℃水浴8-12 min；

（4）加入70-80 份饱和NaCl，充分混匀，室温下10000-12 000 RPM离心3-8 min，将上清转移到新的1.5 ml离心管中；

（5）加入2倍体积室温下的无水乙醇，充分混匀，室温下10 000-12000 RPM离心2-5 min，弃上清；

（6）加入400-600 份冰浴的70%-80%乙醇，颠倒混匀数次，10 000-12000 RPM离心1-5 min，弃上清；

（7）烘箱中60-70℃干燥5-15 min，加入80-150 μl ddH₂O，60-70℃水浴10-20 min，-20℃保存。

上述的试剂配制：

(1)低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl，余份为水。

(2)细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液。

 

本发明的提取方法平均基因组DNA得率介于Rapid Method法和试剂盒法之间，基因组DNA得率较理想，能较好地满足研究的需要。DNA纯度通常用A260/A280比值来检测，本发明的提取方法测得的A260/A280比值为1.35~1.68，平均为1.46；而Rapid Method法和试剂盒法的平均A260/A280比值分别为1.37、1.56。分子克隆中报道，没有酚的核酸样品其A260/A280比值应为1.2左右。