[发明专利]一种干扰BVDV复制的shRNA表达载体及构建的重组细胞

权利要求书

1.一种干扰BVDV复制的shRNA，其特征在于，为SEQ.ID.NO.1～SEQ.ID.NO.6所示的shRNA中的一种。

2.一种干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，包括shRNA表达框，所述的shRNA表达框包括SEQ.ID.NO.1、SEQ.ID.NO.2、SEQ.ID.NO.4中的一种shRNA，在shRNA的上下游分别设有hU6启动子和Sv40终止子。

3.如权利要求2所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，包括两个shRNA表达框，两个shRNA表达框相向排列。

4.如权利要求3所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，包括由shRNA1构成的表达框和由shRNA2构成的表达框，两个表达框相向排列。

5.如权利要求3或4所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的两个表达框的元件排列为：hU6启动子-shRNA1-Sv40终止子-Sv40终止子-shRNA2-hU6启动子。

6.如权利要求2所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的包含干扰BVDV复制的shRNA片段的表达载体，还包含attB序列、抗生素筛选基因和标记基因。

7.如权利要求6所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的抑制BVDV复制的shRNA表达载体，所述的所述的attB序列的下游还设有CMV组成型启动子，CMV组成型启动子下游插入两个同向的LoxP元件，在LoxP元件下游设有第一荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子，在两个LoxP元件之间设有第二荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子和抗生素筛选元件。

8.如权利要求2所述的干扰BVDV复制的shRNA表达载体，其特征在于，所述的包含干扰BVDV复制的shRNA片段的表达载体为：pARNG-2shRNA-BVDV，将两个相向排列的shRNA表达框克隆到pUC ori的下游。

9.一种包含干扰牛病毒性腹泻病毒复制的shRNA片段的重组牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，转染pARNG-2shRNA-BVDV表达载体，该载体先通过HindIII/EcoRI多克隆位点将由shRNA1构成的表达框克隆到pARNG载体上，再通过SacI/HindIII多克隆位点将由shRNA2构成的表达框克隆到其下游而得到。

10.权利要求9所述的包含干扰牛病毒性腹泻病毒复制的shRNA片段的重组牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆核供体细胞的应用。