[发明专利]岩黄连生物碱提取物及制备方法、脱氢卡维丁的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别地，涉及岩黄连生物碱提取物及制备方法、脱氢卡维丁的提取方法。

背景技术

岩黄连(Corydalis saxicola Bunting)，罂粟科紫堇属植物，多年生草本。具有显著的镇痛安定、抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗病毒、利胆、免疫调节作用，在临床上可用于急性黄疸型肝炎、病毒性肝炎、慢性肝炎、高胆红素血症、肝硬化、肝癌等疾病的治疗。其有效成分是以脱氢卡维丁(岩黄连碱，dehydrocavidine)为主的多种生物碱，生物碱含量高低直接影响药材的质量和疗效。

岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种。现在资源极少，野生状态下只生长在桂西北的凤山等县及贵州、云南南部的石灰岩地区阴湿的岩洞口。由于生境条件恶劣，其自然繁殖率很低，种群发展困难，资源蕴藏量十分有限。近年来，经过科技人员的研究，从岩洞人工栽培入手，根据岩黄连独特的特征，模仿自然环境，进行人工栽培，取得了成功，使得岩黄连药物的生产有了稳定的原料来源。目前已制成岩黄连总生物碱的注射液和片剂，用于临床，成为当前主治肝炎特别是乙型肝炎、肝硬化、肝癌等的特效药品。

传统的岩黄连生物碱提取工艺为：将岩黄连洗净晒干，粉碎成粗粉，用5倍量90％乙醇，浸渍24小时，回流提取4次，每次1小时，合并提取液，减压回收乙醇并浓缩到相对密度为0.92～1.02(60℃)的清膏，放冷，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.16～1.20(60℃)的稠膏。于稠膏中加入适量蒸馏水，用10％盐酸溶液调节pH值2～3，搅拌充分，滤过，用10％盐酸溶液洗4～5次，合并酸水液，用碳酸钠调节pH值9～10，析出棕褐色沉淀，滤过，滤渣用5倍氯仿提取5～6次，合并氯仿液，加无水硫酸钠脱水，滤过，回收氯仿至近干，再加少量酒精，减压回收溶剂，干燥，即得。该工艺存在得率低、劳动强度大、易造成环境污染等缺点，而且工艺中使用了氯仿，严重危害生产人员的身体健康。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供岩黄连生物碱提取物的制备方法，该制备方法提高了有效成分的溶出率，从而大大提高了提取物中总生物碱的含量。

本发明所要解决的技术问题还在于提供上述方法制备得到的岩黄连生物碱提取物，该岩黄连生物碱提取物中的总生物碱含量为95％以上，使用的溶剂只有乙醇。

本发明所要解决的技术问题还在于提供脱氢卡维丁的提取方法，该提取方法得到的脱氢卡维丁单体，纯度大于99％。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：岩黄连生物碱提取物的制备方法，包括：

步骤1)，将岩黄连粉碎成粗粉，投入萃取容器中，加入20倍重量的缓冲液后升温，加入复合酶得到预处理混合物，所述缓冲液的pH为2.5～6.0，所述复合酶的用量为2～5％，使所述预处理混合物在温度35～65℃、保温1～16小时，然后用稀盐酸将所述预处理混合物pH值调节至2～3，在温度35～65℃、保温1～10小时，接着4000r/min离心，收集上清液作为提取液；所述复合酶为包括纤维素酶和果胶酶的组合物；

步骤2)，使所述步骤1)得到的提取液通过大孔吸附树脂，用浓度为20％～80％的乙醇溶液作为洗脱液进行解析，收集解吸后的溶液，干燥后得到粗总生物碱。

上述技术方案中，所述萃取容器可以选择萃取罐或其他适合萃取的容器。所述复合酶的用量2～5％是指所述复合酶重量相对于岩黄连与缓冲液的重量和的比例，即复合酶的重量/(岩黄连的重量+缓冲液的重量)＝2～5％。所述复合酶为包括纤维素酶和果胶酶的组合物，其中所述纤维素酶和果胶酶的比例优选纤维素酶∶果胶酶＝1∶0.5～4.5。在此比例范围内，有效成分的溶出率显著提高，从而大大提高了提取物中总生物碱的含量。

所述缓冲液选自磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或其组合。

所述大孔吸附树脂的型号选自HZ-806、AB-8、DA-201、HPD-400、NKA-9、S-8、HPD-500中的任一种。

本发明岩黄连生物碱提取物的制备方法，还包括步骤3)，将所述步骤2)得到的粗总生物碱用缓冲液溶解，在Sephadex LH-20分离柱上进行精制，得到精制后的总生物碱；所述缓冲液选自磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或其组合。所述精制的具体步骤是：粗总生物碱用缓冲液溶解后上柱，然后用洗脱液洗脱，在检测器的监控下收集生物碱的洗脱峰。