[发明专利]微生物发酵生产豆豉溶栓酶的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产豆豉溶栓酶(简称NK)的方法，其包括以下步骤：

(1)将产生NK的微生物进行6～10次活化，再经过产物定向驯化4～6次，使其在26～32℃环境条件下生长良好；

(2)按常规方法将NK产生菌在26～32℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；

(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在26～32℃培养72～144h时，即微生物发酵生产NK结束；

(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集到的液体即为粗酶液；

(5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，在步骤(5)之后进一步包括：将步骤(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中菌种产物定向驯化培养基、液体种子培养基、发酵产酶培养基分别为：

(1)菌种产物定向驯化培养基：蛋白胨3.0～7.0g，牛肉膏3.0～7.0g，纤维蛋白10.0～20.0g，NaCl 5.0～15.0g，琼脂20g，蒸馏水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(2)液体种子培养基：胰蛋白胨8.0～12.0g，酵母粉4.0～6.0g，NaCl 8.0～10.0g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(3)发酵产酶培养基：葡萄糖13.0～17.0g，蛋白胨13.0～17.0g，酵母粉1.2～1.7g，CaCl₂·2H₂O 0.1～0.3g，K₂HPO₄2.0～3.0g，，MgSO₄·5H₂O 0.3～0.7g，KH₂PO₄0.3～0.7g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。