[发明专利]用于检测EML4-ALK融合基因突变的引物、探针及检测试剂盒

权利要求书

1.用于检测EML4-ALK融合基因突变的引物、探针，其特征在于，包括以下序列：SEQ IDNO 1-SEQ ID NO 24。

2.用于检测EML4-ALK融合基因突变的试剂盒，其特征在于，包括以下序列的引物和探针：SEQ ID NO 1-SEQ ID NO 24。

3.如权利要求2所述的用于检测EML4-ALK融合基因突变的检测试剂盒，其特征在于：包括如下的荧光PCR的反应体系：

。

4.如权利要求3所述的检测EML4-ALK融合基因突变的检测试剂盒，其使用方法包括以下步骤：

(1)提取检测样本中的RNA，检测样本包括新鲜病理组织、石蜡包埋组织或胸腔液组织中的RNA；

(2)RNA反转录cDNA，配制实时荧光PCR扩增反应体系；

(3)根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果：检测反应体系的FAM和HEX荧光强度，以FAM达到设定的阈值时所需要的循环次数Ct值作为阴阳性判定标准，Ct值大于等于30：阴性；Ct值小于30：阳性。

5.如权利要求4所述的检测EML4-ALK融合基因突变的检测试剂盒，其特征在于，mRNA反转录cDNA的反应体系为：

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6.如权利要求4所述的检测EML4-ALK融合基因突变的检测试剂盒，其特征在于，RNA反转录cDNA包括以下操作步骤：

(a)取逆转录反应混合液18μl，M-MLV逆转录酶1μl，加入无菌离心管中，混匀。

(b)加入待测样品RNA6μl，RNA总量在0.1～5μg范围内，补水至25μl。

(c)42℃保温1个小时。

(d)95℃保温5分钟后冰上冷却，得到cDNA模板。