[发明专利]一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒及制备方法

说明书

技术领域：

本发明公开一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，用于快速准确识别鹿产品，同时还公开了该试剂盒的制备方法，属于生物检测试剂盒技术领域。

背景技术：

鹿产品是鹿的一些组织或者器官，主要包括有：鹿茸，鹿心，鹿肾，鹿胎，鹿筋，鹿鞭，鹿尾，鹿肉和鹿血等。由于鹿产品大多为名贵中药材，价格昂贵，所以市场上屡见用伪劣产品来冒充名贵的鹿产品。

目前，鹿产品的鉴定大多采用传统方法，主要包括性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定。虽然传统鉴定方法简单、快捷、成本低，但影响传统鉴定方法的因素很多（如人为因素、环境因素、营养因素），因而不能准确地判断鹿产品的伪劣情况。比如在鹿产品的加工过程中，其性状、显微结构、理化性质等常常发生改变，利用传统鉴定方法来鉴定鹿产品可能会出现误判。然而，分子鉴定方法（基于DNA的方法）不受这些因素的影响，且具有准确性大、灵敏度高、稳定性好、通用性强等特点。

发明内容：

本发明提供一种快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，解决了梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、驯鹿及赤鹿以及猪、牛、羊、鸡等常见假冒混合产品的快速检测问题。

本发明还提供了上述快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒的制备方法，通过两个多重PCR方法反应体系（鹿源性反应：梅花鹿，马鹿，塔里木马鹿，赤鹿和驯鹿；猪、牛、羊、鸡源性反应：猪、牛、羊、鸡），采用一步反应来鉴别鹿产品中的其他动物成分。

本发明提供的快速检测鹿产品的多重PCR试剂盒，其特征在于：

包括DNA提取液、鹿源性多重PCR反应液和猪、牛、羊、鸡源性多重PCR反应液和阴性标准品：

1、所述的DNA提取液：

（1）低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份为水；

（2）细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；

（3）蛋白酶K：2份蛋白酶K,100份水；

2、所述的鹿源性多重PCR反应液：

ddH₂O、10×PCR Buffer、dNTPs、引物DF、引物CCF、引物CYF、引物DR、引物RTF、引物RTR、Taq酶：

具体引物序列为：

1）梅花鹿、马鹿、塔里木马鹿、赤鹿和驯鹿特异mtD-loop：

DF（上游）：5’-CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’

DR（下游）：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

2）马鹿特异mtD-loop：

CCF（上游）：5’-CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG-3’

DR（下游）：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

3）塔里木马鹿特异mtD-loop:

CYF（上游）：5’-CTCAACATCCATTTTACATCTTACATTA-3’

 DR（下游）：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

4）驯鹿线粒体特异mt16S rDNA:

RTF（上游）：5’-GGAGTAATCCAGGTCGGTTTCTATC-3’

 RTR（下游）：5’-TAGGGCGGGATATGTTTGTGTATC-3’ ；

3、猪、牛、羊、鸡源性多重PCR反应液：

ddH₂O、10×PCR Buffer、dNTPs、引物SSF、引物SSR、引物OAF、引物OAR、引物GGF、引物GGR、引物BTF、引物BTR、Taq酶；

具体引物序列为：

①猪特异mt12S rRNA-tRNA-Val：

         SSF（上游）：5’-CTACATAAGAATATCCACCACA-3’

SSR（下游）：5’-ACATTGTGGGATCTTCTAGGT-3’

②牛特异tRNA-Val-16S rRNA：

BTF（上游）：5’-GTGCTTGGATAAATCAAGATATAGC-3’