[发明专利]从麻疯树种子中提取分离纯化佛波酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于资源植物学领域，具体说是关于大戟科资源植物中佛波酯类成分的提取分离纯化方法，尤其是大戟科资源植物麻疯树种子中佛波酯类成分的提取分离纯化方法。

背景技术

麻疯树为大戟科麻疯树属植物，为非洲、美洲、亚洲大部分国家和地区的有毒传统药用资源植物，广泛用于各类疾病的治疗，全株有毒，种子最毒，枝、叶次之。麻疯树在中医药体系中是一味有毒中药，收载于《中药大辞典》等著作中，常经过炮制或配伍制毒后应用于临床。近年来，由于其在民族民间传统药物，生物医药、生物农药，特别是生物能源方面的重要资源价值，已受到全世界科研人员的广泛关注。

2008～2010年，学者先后在《当代药物生物技术》(IF:3.404)，《农业化学与食品化学杂志》(IF:2.469)及《毒理与环境健康评论杂志B》(IF:3.617) 发表4篇关于麻疯树资源综合利用进展的综述论文，引用论文近200篇。四篇综述涉及其在民族民间药用、能源、生物活性、营养学等方面的重要进展，在文中，学者均论述“毒”是制约其利用的关键，其中1篇综述就以“麻疯树毒性”为题。

从1949年首次发现麻疯树毒素(毒蛋白)，到2010年甲醇纯化佛波酯类的小鼠急性毒性试验研究，麻疯树“毒”的研究已有近60年历程，集中于两大类毒性组分：毒蛋白类、佛波酯类；然而这些组分同时具有显著的生物活性，如：毒蛋白的抗肿瘤、抗真菌活性，佛波酯类的抗真菌、杀灭农作物病虫害活性等。麻疯树“毒”恰好是其部分生物活性的“效”，又是制约其生物活性资源利用的“毒”。

特别是近年来广泛报道麻疯树中的佛波酯类成分具有显著的生物活性或者具有潜在诱导肿瘤发生用于肿瘤诱导剂的报道，故制备其佛波酯类成分尤其是高纯度的佛波酯成分显得尤为重要，尽管有部分文献已经开展了其佛波酯类成分的提取分离纯化研究，但是由于其提取工艺路线复杂，不适合快速分离和制备出高含量的佛波酯类成分以及高纯度佛波酯类单体成分。

本发明的目的是提供一种简便、快速提取获得高含量的佛波酯类成分和高纯度佛波酯类单体成分的新工艺和新方法。

发明内容

本发明的内容包括麻疯树种子总提取物的提取；麻疯树种子总佛波酯类成分的分离制备；麻疯树种子中佛波酯类单体成分的制备三部分。

本发明的工艺方法步骤如下：1. 麻疯树种子总提取物的提取

将成熟的麻疯树种子自然干燥后，直接粉碎成60~80目的细粉，直接经5~10倍质量乙酸乙酯于-15~25℃静置24~48h，期间不间断的震摇，重复浸提2~3次，提取液并经过1~2倍体积的蒸馏水萃取2~3次，即得到富含佛波酯类成分的总提取物。

2. 麻疯树种子总佛波酯类成分的分离

总提取物经硅胶柱层析，经石油醚、石油醚-正己烷、正己烷，正己烷-乙酸乙酯依次洗脱，收集正己烷-乙酸乙酯部分，浓缩回收溶剂，即得总佛波酯类成分。将总提取物（油状），直接加在预装好的硅胶柱顶端，然后依次用4倍柱体积的石油醚、1~3:3的石油醚-正己烷、正己烷，1~3:3正己烷-乙酸乙酯依次梯度洗脱，收集3:1正己烷-乙酸乙酯部分，硅胶柱采用湿法装柱，固定相为100~200目的硅胶G，柱径为5~30cm，柱高为40~80cm。

 3. 麻疯树种子中佛波酯类单体成分的制备

总佛波酯类成分，经制备HPLC分离，即得5种高纯度的佛波酯类单体成分。将总佛波酯类成分，经:8~2：2的乙腈-水混合溶剂溶解后，过制备HPLC柱，采用检测波长250~280nm波长检测，室温分离，流速为3~5ml/min，制备规格为10~50mm×100~250mm的C8或C18柱，进行制备分离，于15~50min区间收集馏分，即得佛波酯类单体成分Jatropha Factor C₁~C₅。所用制备柱是C8或C18柱，规格为柱径10~50mm，柱长为100~250mm，填料粒径为3.5~4.5μm。

 

附图说明

图1 麻疯树种子中总佛波酯类成分的高效液相色谱图

Ⅰ 表示Jatropha Factor C₁

Ⅱ 表示Jatropha Factor C₂

Ⅲ 表示Jatropha Factor C₃

Ⅳ 表示Jatropha Factor C₄