[发明专利]一种抗原组合物及其制备方法和用途以及肿瘤疫苗

权利要求书

1.一种抗原组合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

(1)将黑色素瘤细胞的可溶蛋白和肺腺癌细胞的可溶蛋白混合，得到肿瘤抗原蛋白；或者将黑色素瘤细胞和肺腺癌细胞混合并提取可溶蛋白，得到肿瘤抗原蛋白；

(2)将所述肿瘤抗原蛋白与不成熟树突状细胞接触；所述不成熟树突状细胞具有CD11c阴性、CD80阴性、CD86阴性、MHC class I H-2K^d阴性和MHC class II I-A^d阴性的表面标记表型并且具有抗原呈递活性；

(3)将与肿瘤抗原接触后的不成熟树突状细胞诱导为成熟树突状细胞；所述成熟树突状细胞具有CD11c阳性、CD80阳性、CD86阳性、MHC classI H-2K^d阳性和MHC class II I-A^d阳性的表面标记表型；

(4)分离所述成熟树突状细胞的细胞膜泡。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述黑色素瘤细胞的可溶蛋白和所述肺腺癌细胞的可溶蛋白的重量比为1∶0.1-10；或者，所述黑色素瘤细胞和所述肺腺癌细胞的细胞数目比为1∶0.1-10。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，步骤(2)中，相对于10⁶个所述不成熟树突状细胞，所述肿瘤抗原蛋白的用量为1-100μg。

4.根据权利要求1、2或3所述的制备方法，其中，步骤(3)中，将与肿瘤抗原接触后的不成熟树突状细胞诱导为成熟树突状细胞的条件包括：将与肿瘤抗原接触后的不成熟树突状细胞与细菌脂多糖接触；相对于10⁶个与肿瘤抗原接触后的不成熟树突状细胞，细菌脂多糖的用量为1-500μg。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的制备方法，其中，步骤(4)中，分离所述成熟树突状细胞的细胞膜泡的方法包括如下步骤：

(a)在匀浆缓冲液中，将所述成熟树突状细胞以0.0005-0.0055英寸的匀浆间隙进行匀浆，得到匀浆产物；所述匀浆缓冲液为含有12-16mM的磷酸钠、135-139mM的氯化钠、2-4mM的氯化钾和8-12mM的乙二胺四乙酸的水溶液，pH值为7.5-8.5；

(b)将所述匀浆产物在400-600×g的离心速度下离心5-15分钟，得到第一上清液；

(c)将所述第一上清液在9000-10000×g的离心速度下离心25-35分钟，得到第二上清液；

(d)将所述第二上清液在90000-110000×g的离心速度下离心60-80分钟，得到的沉淀即为所述成熟树突状细胞的细胞膜泡。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述不成熟树突状细胞来自树突状细胞系DC2.4和/或原代骨髓单核细胞。

7.权利要求1-6中任意一项所述的制备方法得到的抗原组合物。

8.权利要求7所述的抗原组合物在制备肿瘤疫苗中的用途。

9.一种肿瘤疫苗，该肿瘤疫苗包括权利要求7所述的抗原组合物和免疫佐剂。

10.根据权利要求9所述的肿瘤疫苗，其中，所述免疫佐剂为非甲基化CpG二核苷酸寡脱氧核苷酸、错位双链核糖核酸和粒细胞集落刺激因子中的一种或多种。