[发明专利]鉴定鸡新城疫病毒流行株与疫苗株的RT-PCR法

权利要求书

1.鉴定鸡新城疫病毒流行株与疫苗株的引物组合，其特征在于，其包括：

上游引物P1：5’-GTCGTGCTCAGTGATGTG-3’；

上游引物P2：5’-GCTCCGCCTACTCCGTCAG-3’；

下游引物P3：5’-TTGTTACCTCAATGTGCC-3’；以及

下游引物P4：5’-GCAGGAACTTGACTATGA-3’。

2.含有权利要求1所述引物组合的用于鉴定鸡新城疫病毒流行株与疫苗株的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括随机引物、反应缓冲液、dNTPs、Rnase抑制剂、反转录酶、PCR Taq mix、DEPC处理水中的一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性标准模板。

5.鉴定鸡新城疫病毒流行株与疫苗株的RT-PCR法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样本总RNA的提取；

2)反转录得到样本cDNA；

3)以样本cDNA为模板，使用权利要求1的引物组合进行PCR扩增；

4)分析PCR扩增产物，结果判定。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)中PCR反应体系以20μl计为：

PCR反应条件为：95℃5min；94℃45s，53.5℃45s，71℃60s，共30个循环；71℃10min。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中反转录生成cDNA的方法为：

在0.2ml离心管内加入下列成分：

RNA溶液                    6μl

500μg/ml随机引物          1μl

轻轻混匀，70℃水浴5min，冰浴2min；

然后向上述离心管中加入下列成分：

混匀，将上述反应体系置于37℃1h，95℃5min，得到样本cDNA。