[发明专利]检测禽白血病群特异性抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒

权利要求书

1.检测禽白血病群特异性抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于包括包被抗禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体的酶标板；

所述的单克隆抗体由杂交瘤细胞株分泌产生，所述的杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株2E5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5961。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的单克隆抗体的包被量为2μg/ML。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于还包括抗禽白血病病毒p27蛋白的多抗、酶标抗兔二抗、封闭液以及稀释液，所述的封闭液优选为含有50g/L的脱脂奶粉的10mM pH 7.2的磷酸缓冲液；所述的稀释液优选为10mM pH 7.2的磷酸缓冲液。

4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒在制备检测禽白血病群特异性抗原试剂中的应用。

5.利用权利要求1-3所述的试剂盒检测禽白血病病毒群特异性抗原的方法，其特征在于按照双抗体夹心ELISA检测方法进行检测，具体的包括以下步骤：

(1)包被抗禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体的酶标板4℃过夜后用含0.5％吐温20的磷酸缓冲液洗涤，37℃封闭液封闭4h，洗板；

(2)加入待检样品，室温孵育，洗板；

(3)加入纯化的多抗，室温孵育，洗板；

(4)加入酶标抗兔二抗，室温孵育，洗板；

(5)加入TMB显色液，室温显色，最后加2mol/L硫酸终止反应，测定OD450nm值。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的单克隆抗体的包被量为2μg/ML，待检样品原倍，多抗的浓度为4μg/ML，酶标抗兔二抗的稀释度为1∶3000，待检样品、多抗、酶标抗兔二抗及TMB的作用时间分别为1h，1h，1h和20min，封闭液为含有50g/L的脱脂奶粉的10mM pH 7.2的磷酸缓冲液。

7.一种分泌权利要求1所述的抗禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株2E5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其微生物保藏号为：CGMCC No.5961。

8.由权利要求7所述的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体。

9.权利要求7所述的杂交瘤细胞株在制备检测或诊断禽白血病病毒感染试剂中的用途。

10.权利要求8所述的单克隆抗体在制备检测或诊断禽白血病病毒感染试剂中的用途。