[发明专利]一种食甲醇芽孢杆菌及其烟用咖啡浸膏的制备方法和应用

权利要求书

1.一种食甲醇芽孢杆菌，该菌株名为Bacillus methylotrophicus VJ4-1，保藏编号CCTCC NO：M 2012004，食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus CCTCC NO：M 2012004的生物学特征是：是革兰氏阳性菌，能在10％NaCl中生长，有精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶活性，能产酸、使牛奶液化；能以N-乙酰葡萄糖胺、甘露醇、葡萄糖、水杨素、D-蜜二糖、D-核糖、肌醇、蔗糖、麦芽糖、D-山梨醇、L-阿拉伯糖、DL-乳酸盐、L-丙氨酸糖原、L-脯氨酸组氨酸、柠檬酸盐为碳源的培养基上生长，其16S rRNA序列与Bacillus methylotrophicus的16S rRNA序列比对相似性达到100％。

2.一种利用食甲醇芽孢杆菌生物转化烟用咖啡浸膏的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将咖啡豆粉碎至10～200目，与水按质量比1∶20～40回流提取1～3小时后过滤，将滤液灭菌；

2)斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在25～35℃、pH5～10条件下，静置培养24～72小时；

3)制备种子培养液：用上述步骤2)中所得的斜面培养物，接种到种子培养基，在25～35℃，转速100～150rpm条件下振荡培养12～36h，连续转接1～4次后制得种子培养液；

4)发酵：将种子培养液按体积比5～20％接种到上述步骤1)中的咖啡滤液中形成发酵液，上述发酵液的装罐量为20～40％，在pH4～10，温度25～40℃，转速100～200rpm，不避光条件下发酵7～14天；

5)将步骤4)中所得的发酵液和95％乙醇按体积比1∶3～4，沉淀过夜后抽滤，将滤液减压浓缩除去溶剂，制得相对密度为1.20～1.36的烟用咖啡浸膏。

3.根据权利要求2所述的一种利用食甲醇芽孢杆菌生物转化烟用咖啡浸膏的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基为：马铃薯浸液200mL/L，葡萄糖20g/L，琼脂13g/L。

4.根据权利要求2所述的一种利用食甲醇芽孢杆菌生物转化烟用咖啡浸膏的制备方法，其特征在于，所述种子液培养基组成为：麦芽糖50g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L。

5.一种根据权利要求2所得烟用咖啡浸膏的应用，其特征在于：所述烟用咖啡浸膏加入卷烟中，用于协调烟气、增加淡甜香、果香、使烟气细腻柔和、降低刺激、减少杂气、改善吸味，加入卷烟中烟用咖啡浸膏的质量比为0.05～0.15％。