[发明专利]一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法

权利要求书

1.一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：步骤如下：

步骤一、将寡核苷酸文库进行毛细管区带电泳，在寡核苷酸文库电泳峰宽时间范围内，按迁移时间分段收集得到次级库；

步骤二、将各次级库分别与同种靶分子混合，进行毛细管区带电泳，比较各次级库与靶分子相互作用的强弱，得到与靶分子结合能力最强的次级库；

其中，毛细管区带电泳所用运行缓冲溶液为毛细管区带电泳领域中所用的pH＞7.0的缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：步骤一中，将寡核苷酸文库溶于运行缓冲溶液中制成储备液后，进行毛细管区带电泳，检测得到寡核苷酸文库电泳峰；再将所述储备液进行毛细管区带电泳，在寡核苷酸文库电泳峰宽时间范围内，按迁移时间进行分段收集，分段收集的样品为次级库。

3.根据权利要求1所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：步骤二中，将各次级库分别与同一种类且浓度相同的靶分子混合，冰上孵育后进行毛细管区带电泳，检测得到各次级库与靶分子混合后的毛细管区带电泳谱图；在毛细管区带电泳谱图中，复合物峰为各次级库中的DNA与靶分子结合产生的峰，游离DNA峰为没有与靶分子结合的各次级库中DNA产生的峰；利用面积归一化法，得到复合物的校正峰面积和游离DNA的校正峰面积，进一步计算复合物校正峰面积/(复合物校正峰面积+游离DNA校正峰面积)的百分比，比较不同次级库与同种靶分子相互作用的强弱，得到与靶分子结合能力最强的次级库。

4.根据权利要求1所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：靶分子为牛凝血酶时，运行缓冲溶液为硼酸根离子浓度为80mM，pH＝8.0的硼酸-硼砂缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：靶分子为牛凝血酶时，毛细管区带电泳中所用毛细管为石英熔融毛细管，外包硅胶层，毛细管内径75μm，总长度50.2cm，检测窗口边长为0.2cm，窗口距离出样端10cm。

6.根据权利要求2所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：储备液中的寡核苷酸文库浓度为20μM；将次级库收集在稀释10倍的运行缓冲液中。

7.根据权利要求3所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：冰上孵育时间为0.5～2h。

8.根据权利要求1、2或3任一项所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：进行毛细管区带电泳时的温度为15℃；毛细管区带电泳采用加压进样，进样压力为0.5psi，进样时间为5s，电泳电压为10kV，采用正向电压。

9.根据权利要求1、2或3任一项所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：对毛细管区带电泳结果采用激光诱导荧光进行检测，其中激发波长488nm，发射波长520nm。

10.根据权利要求1或2所述的一种基于毛细管区带电泳的寡核苷酸文库分级和评价方法，其特征在于：在步骤一完成后，对收集到的次级库进行验证，验证方法为，将分段收集得到的各次级库分别通过毛细管区带电泳，检测各次级库的出峰时间；

如果出峰时间与分段收集时该次级库在寡核苷酸文库电泳峰中的出峰时间相同，收集成功，接步骤二；

如果出峰时间与分段收集时该次级库在寡核苷酸文库电泳峰中的出峰时间不同，收集失败，重复步骤一。