[发明专利]甲状腺素磁微粒荧光发光免疫分析试剂盒及其制备方法

说明书

[技术领域]

本发明涉及一种免疫分析医学中的检测试剂盒，具体设计一种甲状腺素磁微粒荧光发光免疫分析试剂盒及其制备方法。该试剂盒结合了免疫磁微粒分离技术和荧光免疫分析技术，检测范围宽，灵敏度高，抗干扰强。

[背景技术]

甲状腺疾病是常见的内分泌疾病，全球患病人数已超3亿，中国患者超过6.7千万，且呈逐年增加。最新的《中国十城市甲状腺病流行病学调查》统计结果显示，我国十城市的甲亢患病率为3.7％、甲减患病率为6.5％、甲状腺结节患病率为18.6％。因甲状腺疾病具有多发性，临床症状多样性及复杂性的特点，血清甲状腺激素测定在临床中应用十分广泛。本试剂盒用于定量检测人血清中的总甲状腺素(TT4)的含量。

T4是甲状腺分泌的主要产物，也是构成下丘脑-垂体前叶-甲状腺调节系统完整性不可缺少的成份。对合成代谢有影响作用。T4由二分子的二碘酪氨酸(DIT)在甲状腺内偶联生成。T4与甲状腺球蛋白结合贮存在甲状腺滤泡的残腔中，在TSH的调节下分泌释放。T4及其相关的甲状腺激素T3负责对人体中各种生化过程进行调节，这些过程是正常新陈代谢和神经活动的基础。尽管T3具有很强的生物能量，但T4通常以约50倍于循环T3的形式存在于人血清中。血清中99％以上的T4以与其它蛋白质结合的形式存在，不具生物学活性。由于血清中运输蛋白质的浓度易受外源性和内源性作用的影响，因此，在检测血清T4浓度的过程中需考虑到结合蛋白质的状况。如果忽略这一点，会导致反映甲状腺代谢状况检测的错误结果。

血清总T4检测是最早应用于临床检测甲状腺功能的甲状腺激素，对于评价甲状腺功能可以说功不可没。正常成人血清TT4水平为64-154nmol/L(5-12ug/dl)。T4水平升高见于甲亢，高TBG血症(妊娠，口服雌激素及口服避孕药，家族性)，急性甲状腺炎，亚急性甲状腺炎，急性肝炎，肥胖症，应用甲状腺激素时，进食富含甲状腺激素的甲状腺组织等。水平降低可见于甲减，低TBG血症(肾病综合征，慢性肝病，蛋白丢失性肠病，遗传性低TBG血症等)，全垂体功能减退症，下丘脑病变，剧烈活动等。T4测定可用于甲亢、原发性和继发性甲减的诊断以及TSH抑制治疗的监测等，具有较高的临床诊断价值。

免疫学测定是以抗体-抗原的特异性识别、抗体标记技术和示踪技术为基础的定量技术。在肿瘤标志物的体液检测中具有广泛应用。现有的甲状腺激素的测定方法有平衡透析法、放射免疫法、酶联免疫吸附分析法、时间分辨荧光免疫分析法、电化学发光检测及微孔板酶促化学发光免疫分析法等。但这些方法都具有一定局限性，，如平衡透析法操作步骤繁琐，操作时间长；放射免疫分析方法的试剂具有放射性，会对操作人员的身体健康产生影响，操作不能实现自动化；酶联免疫分析方法灵敏度低，步骤繁琐；时间分辨荧光免疫分析法与电化学发光检测法都需要较为昂贵的稀土元素作为试剂，不利于大范围的推广使用；微孔板酶促化学发光免疫分析法则受到固相载体表面积的限制，无法实现较宽范围的检测。

在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测无，是临床检验工作者面临的难题之一。免疫磁微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲合力的各种免疫活性物质(抗原或抗体)，使其致敏为免疫磁微粒，具有分离速度快、效率高、可重复性好；操作简单；不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

免疫磁微粒分析技术与荧光发光免疫分析技术结合检测待测物，可大大提高检测的灵敏度和准确性，它以毫米级磁微粒为载体，利用表面有机物提供的羧基活性集团与蛋白质氨基共价结合，采用抗体进行“搭桥”成免疫磁微粒，可进行抗原、抗体反应。该技术的新颖之处有：(1)采用微小的磁微粒作为固相可增加包被表面积，从而增加了抗原抗体的有效包被量，不仅节省了原料，而且有助于建立宽分为的免疫检测方法，尤其适合于高浓度临床样本的测定，避免HOOK效应的发生；(2)利用顺磁铁微粒为固相载体，外包抗原或抗体，增加抗原、抗体的接触面积及底物发光面积，提高反应的灵敏度，并采用旋转磁场使磁微粒起搅拌作用及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用。