[发明专利]桑树查尔酮异构酶基因及应用

权利要求书

1.桑树查尔酮异构酶基因MaCHI，其特征在于具有说明书序列表所示的桑树查尔酮异构酶基因核苷酸全序列、桑树查尔酮异构酶基因开放阅读框ORF序列及3′端非编码区、桑树查尔酮异构酶基因编码的氨基酸序列，以及在此序列基础上进行密码子优化或点突变所产生的与原始序列相似度在90%以上的序列。

2.权利要求1所述的桑树查尔酮异构酶基因全长的克隆方法，其特征在于依次通过以下步骤实现：

1）  根据蔷薇科植物草莓或苹果的查尔酮异构酶基因保守序列设计兼并引物，以桑树叶片基因组为模板，扩增桑树查尔酮异构酶基因的保守区域；

2）  基于获得的桑树查尔酮异构酶基因的保守区域设计基因特异引物，采用接头PCR获得保守区域的侧翼序列；

3）  采用软件sequencher（http://genecodes.com/）将获得的侧翼序列与保守区域序列进行拼接，采用NCBI网站的blastx程序预测拼接序列中含有的基因开放阅读框（ORF）及编码的氨基酸序列；

4）以桑树叶片cDNA为模板扩增桑树查尔酮异构酶基因开放阅读框（ORF），并连接到pMD19-T Vector（TaKaRa），挑选阳性克隆并测序。    

3.权利要求1所述桑树查尔酮异构酶基因MaCHI的应用，其特征在于将该基因应用于真核及原核表达。

4.权利要求1所述桑树查尔酮异构酶基因MaCHI应用于过量表达提高桑树类黄酮的含量。

5.权利要求1所述桑树查尔酮异构酶基因MaCHI应用于抑制查尔酮异构酶基因的表达获得新的转基因株系。

6.权利要求1所述桑树查尔酮异构酶基因MaCHI应用于其他植物品种的转基因。