[发明专利]b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法

权利要求书

1.b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）Hib菌种一至四代传代培养，它包括以下传代培养步骤：

A、第一代培养：开启Hib菌种传代至5～10mlHib液体培养基，放入恒温摇床振荡培养16～20h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；

B、第二代培养：将第一代培养所得的Hib菌种接种到10～20mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；

C、第三代培养：将第二代培养所得的Hib菌种接种到20～50mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养6～8h，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；

D、第四代培养：将第三代培养所得的Hib菌种接种到500～1000mlHib液体培养基，继续放入恒温摇床振荡培养，直到培养基中菌浓度达到100～200亿/ml，其中，恒温摇床振荡培养的温度为35～37℃、回旋频率为250～330rpm；

（2）种子罐培养：将第四代培养所得的Hib菌种接种到种子罐中，恒温搅拌通气培养，直到菌浓度达到200～300亿/ml，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为100～200rpm；

（3）发酵罐培养：将在种子罐中培养所得的Hib菌种接种到发酵罐中，恒温搅拌通气培养，在此过程中向发酵罐中补加浓度为10%的葡萄糖溶液，至Hib细菌至对数生长期后期或静止期前期，菌浓度达到300～400亿/ml时停止搅拌培养，其中，恒温搅拌通气培养的温度为35～37℃、搅拌频率为200～300rpm；

（4）杀菌、取上清液：向发酵罐中加入甲醛溶液至甲醛终浓度为1～2%进行杀菌，待杀菌完成后，取发酵液上清液；

（5）纯化：对上清液进行纯化处理，获得b型流感嗜血杆菌荚膜多糖成品。

2.根据权利要求1所述的b型流感嗜血杆菌高密度培养生产细菌荚膜多糖的方法，其特征在于：所述的Hib液体培养基包括以下重量比的组分：胰蛋白胨10～20，酸水解酪蛋白5～15，酵母提取物5～30，氯化钠2～8.5，葡萄糖5～20，氯化血红素0.01～0.03，辅酶I 0.01～0.03。