[发明专利]一种Hib多糖与蛋白结合工艺的优化方法有效
| 申请号： | 201210121334.5 | 申请日： | 2012-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN102633898A | 公开（公告）日： | 2012-08-15 |
| 发明（设计）人： | 伍长华;吴强;关晓峰;陈克平 | 申请（专利权）人： | 成都欧林生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00;A61K39/385;A61K39/102;A61P31/04 |
| 代理公司： | 成都金英专利代理事务所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hib 多糖 蛋白 结合 工艺 优化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种Hib多糖与蛋白结合工艺的优化方法，其特征在于：它包括以下多糖衍化、多糖-TT结合物制备两个步骤，其中，所述的多糖衍化包括以下子步骤：
S11：在Hib荚膜多糖中加入注射用水，稀释成终浓度为1～2 mg／ml的溶液；
S12：加入0.1～0.4倍于多糖质量的CNBr，进行活化处理；
S13：活化完成后，加入3～5倍于多糖质量的SDH，进行偶联反应；
S14：将偶联反应所得的反应物分装于透析袋内，并置于0.02～0.08mol／L的NaCl溶液中透析2～3次，每次透析8～12小时，去除残余氰化物，然后超滤浓缩至原体积，得到多糖-SDH衍生物；
所述的多糖-TT结合物制备包括以下子步骤：
S21：在多糖-SDH 衍生物溶液中加入等体积的浓度为1～2mg／ml的TT溶液，混均匀后置于冰浴中25～35分钟，水浴温度控制为2～8℃；
S22：冰浴完成后，加入EDAC粉末至终浓度为15～25mmol／L，保持pH为4.5～4.9，于2～8℃的温度条件下反应1.5～2.5h，得到中间反应物；
S23：将中间反应物经Sepharose 4FF凝胶柱分离纯化，收集KD值小于0.3的洗脱液，并将收集到的洗脱液进行除菌过滤，得到多糖-TT结合物，并置于2～8℃下保存。
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