[发明专利]梨小食心虫成虫触角总RNA的提取方法无效

申请号：	201210121388.1	申请日：	2012-04-24
公开（公告）号：	CN102634508A	公开（公告）日：	2012-08-15
发明（设计）人：	仵均祥;张国辉;许向利;李怡萍	申请（专利权）人：	西北农林科技大学
主分类号：	C12N15/10	分类号：	C12N15/10
代理公司：	西安恒泰知识产权代理事务所 61216	代理人：	李郑建
地址：	712100 陕***	国省代码：	陕西;61
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摘要：
搜索关键词：	梨小食心虫成虫触角 rna 提取方法
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【权利要求书】：

1.一种梨小食心虫成虫触角总RNA的提取方法，其特征在于，将梨小食心虫成虫在低温条件下冷冻昏迷，用小型医用剪刀和镊子将数根触角剪下，并立即置浸在液氮中的1.5ml离心管中，然后从液氨中取出离心管并马上加入少量总RNA提取液，用匀浆器将其充分匀浆后加入足量总RNA提取液，移液器吹打数次后转入另一新离心管中，然后按照总RNA提取方法，经氯仿抽提，异丙醇和乙醇沉淀分离得到高纯度的总RNA。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的低温条件为温度-20℃，时间为8min。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的剪刀和镊子均为长度12.5cm的小型医用剪刀和镊子。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的触角数量为50根。

5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述浸在液氮中的1.5ml离心管为去盖离心管。

6.如权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述的去盖离心管带有直径为2cm的浮标并且离心管中盛有50ul的液氮。

7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的匀浆器为微量电动组织匀浆器，该匀浆器配套使用1.5ml的塑料研磨棒。

8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的少量总RNA提取液的量为125ul。

9.如权利要求1所术的提取方法，其特征在于，所述总RNA的提取方法包括下列步骤：

A、首先将盛有足量总RNA提取液的匀浆样品室温放置5min，12000g，4℃离心10min。

B、然后加入200ul氯仿，盖紧离心管，剧烈震荡30s，待溶液充分乳化后，室温静置3min，12000g，4℃离心15min。

C、从离心机中取出离心管，吸取上清液转入另一新离心管中，向上清液中加入500ul的异丙醇后充分混匀，室温放置20min，12000g，4℃离心15min。

D、弃上清，慢慢沿离心管壁加入浓度为75％的乙醇1ml，12000g，4℃离心5min后弃去乙醇，室温干燥3min，然后加入适量DEPC处理后的超纯水溶解沉淀，得到高纯度的总RNA。