[发明专利]黄牛I‑mfa基因的单核苷酸多态性位点及其检测方法

权利要求书

1.黄牛I-mfa基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、以包含I-mfa基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛I-mfa基因；

所述的引物对P为：

上游引物P1：TTCTCCTCCATCGCCCTTTTC；

下游引物P2：ATGCTGCTGCCGCTCCCT；

(2)、对步骤(1)的扩增产物进行PCR产物的切胶回收及纯化、测序；

(3)、对步骤(2)的纯化产物进行PCR-SSCP检测：首先对纯化的PCR产物用变性剂进行变性处理，再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果鉴定其多态性位点的基因型；

步骤(3)中根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果鉴定黄牛I-mfa基因的多态性位点的基因型，所述多态性位点为：黄牛I-mfa基因第12284位为A或G的碱基多态性位点和黄牛I-mfa基因第12331位为T或C的碱基多态性位点，表现为AATT、AGTC、GGCC三种基因型；所述第12284位为A或G的碱基多态性位点是指扩增产物5’GGCGGCGCCAGGCGG 3’序列段中第4位为A或G的碱基多态性位点，所述第12331位为T或C的碱基多态性位点是指扩增产物5’CCAAGGCCCATCG 3’序列段中第11位为T或C的碱基多态性位点，AGTC基因型的体重值和胸宽显著高于纯合的黄牛品系。

2.如权利要求1所述的黄牛I-mfa基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，62.8℃退火1min，72℃延伸45s，32个循环；72℃延伸10min。

3.如权利要求1所述的黄牛I-mfa基因的单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，步骤(3)中聚丙烯酰胺凝胶的浓度为10％。