[发明专利]一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.杂交瘤细胞株1D5，其特征在于由ZEN单抗免疫小鼠得到的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成，于2012年4月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：C201238。

2.一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体，其特征在于由权利要求1所述杂交瘤细胞株1D5分泌得到，该玉米赤霉烯酮抗独特型抗体为β型抗独特型抗体。

3.权利要求2所述玉米赤霉烯酮抗独特型抗体的制备方法，其特征在于步骤如下：

（1）制备ZEN单克隆抗体：采用活泼酯法将ZEN与OVA偶联制备免疫抗原，ZEN与BSA偶联制备检测抗原，免疫BALB/c小鼠，细胞融合，经过筛选后获得杂交瘤细胞，通过小鼠体内诱生法制备腹水型ZEN单克隆抗体；

（2）以ZEN单克隆抗体为免疫原，免疫小鼠，细胞融合，经过筛选得到杂交瘤细胞株1D5，诱导分泌抗体；以ZEN为竞争物，通过竞争ELISA筛选最终得到玉米赤霉烯酮抗独特型抗体。

4.根据权利要求3所述玉米赤霉烯酮抗独特型抗体的制备方法，其特征在于步骤（1）

所述杂交瘤细胞为杂交瘤细胞1G4G10D3，于2012年4月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：C201237。

5.根据权利要求3所述玉米赤霉烯酮抗独特型抗体的制备方法，其特征在于步骤（2）

具体方法为：ZEN单克隆抗体与KLH偶联，偶联物免疫BALB/c小鼠，经血清效价和灵敏度检测合格后，再进行偶联物腹腔注射，3天后取小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞融合，用HAT或HT选择培养基培养融合细胞，同时采用间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选阳性克隆，得到杂交瘤细胞株1D5，分泌产物经过纯化，得到玉米赤霉烯酮抗独特型抗体。

6.权利要求2所述玉米赤霉烯酮抗独特型抗体在玉米赤霉烯酮检测中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于利用ZEN单克隆抗体和玉米赤霉烯酮抗独特型抗体建立ZEN的竞争ELISA，进行无毒检测。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于检测玉米赤霉烯酮的步骤为：

（1）用生物素标记玉米赤霉烯酮抗独特型抗体；

（2）间接ELISA确定生物素标记玉米赤霉烯酮抗独特型抗体的效价；

（3）检测ZEN对生物素标记玉米赤霉烯酮抗独特型抗体与ZEN单抗结合的抑制，同时检测玉米赤霉烯酮抗独特型抗体对生物素标记玉米赤霉烯酮抗独特型抗体与ZEN单抗结合的抑制，分别绘制ZEN和玉米赤霉烯酮抗独特型抗体的抑制曲线及其相应线性回归方程；根据抑制率在20%-80%间，在相同抑制率条件下，ZEN与抗ZEN单抗独特型抗体间浓度对应关系，绘制ZEN替代标准曲线及对应的线性回归方程，作为定量换算公式；

（4）检测时用玉米赤霉烯酮抗独特型抗体作为标准品，根据标准曲线计算出实验抑制率所对应的玉米赤霉烯酮抗独特型抗体质量浓度，再根据定量换算公式计算出对应的ZEN浓度。