[发明专利]一种预防鸡疾病的疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种鸡病原黄杆菌菌株，保藏号为CCTCC M 2012100。

2.一种制备权利要求1所述的鸡病原黄杆菌菌株的方法，其特征在于，

菌种的分离：取发生传染性肝炎的病鸡肝部组织一小块放于装有1% TritonX-100的EP管中，用研磨棒研碎后，各取一定量于分别含有不同抗生素氨苄，卡纳和氯霉素的LB平板涂布，37℃培养24h；结果只有在含有氨苄和卡纳的平板上有菌落生长；

菌种扩大培养：从上述长菌的平板中挑单菌落到含抗生素的LB液体培养基中，37℃摇床培养24-30小时；

菌种鉴定：取上述扩大培养的菌液测序，得出所测的菌种是黄杆菌；

所述菌种扩大培养中所述的抗生素为同时含有氨苄和卡纳，测序所用引物为16s引物，序列分别为：AGAGTTTGATCCTGGCTCA和GGTTACCTTGTTACGACTT。

3.一种含有权利要求1所述鸡病原黄杆菌菌株的疫苗。

4.权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗是灭活疫苗。

5.权利要求3所述的疫苗用于预防鸡传染性支气管炎、肝炎病菌引起的疾病的用途。

6.一种利用权利要求1所述的菌株制备权利要求4所述灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

    接种：将权利要求1所述鸡病原黄杆菌菌株用灭菌生理盐水稀释后注射接种7日龄易感雏鸡；取病鸡肝部组织一小块放于装有1% TritonX-100的EP管中，用研磨棒研碎，制成生产用菌种；

灭活病菌液：将上述制成的生产用菌种中加入甲醛溶液，边加边充分摇匀，置摇床灭活，作为制苗用抗原液；

乳化制备疫苗：油相：注射用花生油占10%，水相：淀粉占2%和87ml的PBS混合后灭菌，之后将灭菌的吐温-80加到水相之中，将上述佐剂加上同样体积的制苗用抗原液后进行乳化，充分振摇使吐温完全溶解；在乳化终止前加入防腐剂；

分装：将乳化得到的疫苗分装于灭菌疫苗瓶内，密封，4℃保存即可。

7.权利要求4的灭活疫苗的制备方法，其特征在于，还包括检测是否完全灭活的步骤。

8.权利要求4的灭活疫苗的制备方法，其特征在于，灭活病菌液时，甲醛的终浓度约为0.4%，37℃摇床灭活48小时。

9.权利要求4的灭活疫苗的制备方法，其特征在于，乳化制备疫苗时，吐温-80加入量占水相体积的1％，防腐剂为1％硫柳汞，加入量占疫苗总体积的1％，最终浓度为万分之一。

10.一种按照权利要求6－9任一方法制备的疫苗。