[发明专利]一种灵菌红素高产菌株及其生产方法

权利要求书

1.一种灵菌红素高产菌株，名称为Serratia marcescens zl3，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 201209，保藏日期为2012年4月4日，保藏地点为中国.武汉.武汉大学。

2.权利要求1所述灵菌红素高产菌株的生产方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取5 mL污水接种于45 mL含苯酚富集培养基中，30℃、130 r/min培养72 h。

3.取经过驯化的菌液各1mL涂布在含苯酚的无机盐培养基平板上30℃培养72 h，苯酚终浓度分别为100 mg/L, 300 mg/L, 500 mg/L, 700 mg/L, 1000 mg/L。

4.挑取生长情况良好的菌落在富集培养基平板上划线分离，30℃培养72 h，在含苯酚1000 mg/L的无机盐培养基上进一步培养筛选能产生红色素的菌落；

所述富集培养基(g/L) 的组分为：胰蛋白胨10、酵母浸出物5、NaCl 7.5、苯酚100 mg 、pH 7. 0；

所述无机盐培养基(g/L)的组分为: 硝酸铵1、磷酸二氢钠 0. 5、磷酸氢二钾 0. 5、硫酸镁 0.2、氯化钙 0.1、氯化钠0.2、pH 7.0；

相应的固体培养基加入2%的琼脂粉，含苯酚培养基则加入苯酚；

（2）在富集培养基上培养24~72 h并观察划线平板，部分菌落由起初的淡红色逐渐变为鲜红色，且菌落表面光滑，呈粘稠状。

5.挑取生长情况良好的菌落，用无菌的生理盐水稀释后，涂布于含苯酚1000 mg/L的无机盐培养基中，培养24~72 h并挑取生长情况良好的红色菌落，即为灵菌红素高产菌株。

6.权利要求1所述灵菌红素高产菌株生产灵菌红素的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）一级摇瓶培养（250 mL三角瓶）：蔗糖19 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠3 g/L、硫酸镁2.4 g/L、装液量50 mL，摇速130 r/min，pH为6，30℃培养20-24 h；

（2）二级摇瓶培养（2 L三角瓶）：1%-5%花生粉培养基，装液量50 mL，摇速130 r/min，pH为6，30℃培养20-24 h；

（3）三级发酵培养（50 L发酵罐）：1%-5%花生粉培养基，装料系数0.6，搅拌转速200 r/min，溶氧20%-40%，pH为6，5%接种量，25-30℃培养30-40 h。

7.灵菌红素的产量达6-8 g/L；

（4）纯化方法：发酵液离心后收集菌体，按湿菌体质量的5-20倍加入酸性无水乙醇，搅拌提取，提取液经0.5 μm滤膜过滤后，旋转蒸发浓缩得到色素粗品，回收溶剂，色素粗品用乙醇复溶，用石油醚：乙酸乙酯= 1：1-10:1进行硅胶柱层析洗脱，收集橙色组分，旋转蒸发浓缩后用乙醇复溶，经Sephadex LH-20柱层析进一步纯化，收集535 nm洗脱峰，浓缩后干燥获得纯度>98%灵菌红素产品。